一、 顯微鏡(jing)的基本光學原理

　　（一） 折(zhe)射和折(zhe)射率

　　光線(xian)(xian)在(zai)均勻的(de)各向(xiang)(xiang)同性介(jie)(jie)質(zhi)中(zhong)，兩(liang)點之間以(yi)直線(xian)(xian)傳(chuan)播，當(dang)通過(guo)不同密度(du)介(jie)(jie)質(zhi)的(de)透明物體時，則(ze)發(fa)生(sheng)折(zhe)射(she)現(xian)象，這是由(you)(you)于光在(zai)不同介(jie)(jie)質(zhi)的(de)傳(chuan)播速度(du)不同造成的(de)。當(dang)與透明物面不垂直的(de)光線(xian)(xian)由(you)(you)空氣射(she)入(ru)透明物體(如玻璃(li))時，光線(xian)(xian)在(zai)其介(jie)(jie)面改變(bian)了方向(xiang)(xiang)，并(bing)和(he)法線(xian)(xian)構成折(zhe)射(she)角。

　　（二） 透鏡的性(xing)能

　　透(tou)(tou)鏡(jing)是組(zu)(zu)成顯微鏡(jing)光(guang)學系統(tong)的更基(ji)本的光(guang)學元件，物鏡(jing)目(mu)鏡(jing)及聚光(guang)鏡(jing)等部件均由(you)單(dan)個和(he)(he)多個透(tou)(tou)鏡(jing)組(zu)(zu)成。依其外形(xing)的不同，可(ke)分為凸透(tou)(tou)鏡(jing)(正透(tou)(tou)鏡(jing))和(he)(he)凹透(tou)(tou)鏡(jing)(負透(tou)(tou)鏡(jing))兩大類。

　　當一束平(ping)(ping)行于光軸的(de)光線通過凸(tu)透鏡后相(xiang)交于一點(dian)，這(zhe)個點(dian)稱(cheng)"焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)"，通過交點(dian)并(bing)垂直光軸的(de)平(ping)(ping)面(mian)，稱(cheng)"焦(jiao)(jiao)(jiao)平(ping)(ping)面(mian)"。焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)有兩個，在(zai)(zai)物(wu)方(fang)(fang)空(kong)間的(de)焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)，稱(cheng)"物(wu)方(fang)(fang)焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)"，該(gai)處的(de)焦(jiao)(jiao)(jiao)平(ping)(ping)面(mian)，稱(cheng)"物(wu)方(fang)(fang)焦(jiao)(jiao)(jiao)平(ping)(ping)面(mian)"；反之，在(zai)(zai)象(xiang)方(fang)(fang)空(kong)間的(de)焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)，稱(cheng)"象(xiang)方(fang)(fang)焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)"，該(gai)處的(de)焦(jiao)(jiao)(jiao)平(ping)(ping)面(mian)，稱(cheng)"象(xiang)方(fang)(fang)焦(jiao)(jiao)(jiao)平(ping)(ping)面(mian)"。

　　光線通過凹透鏡后，成正立虛像(xiang)，而(er)凸透鏡則(ze)成正立實(shi)像(xiang)。實(shi)像(xiang)可在屏幕上顯(xian)現出來(lai)，而(er)虛像(xiang)不能。

　　（三） 凸透鏡(jing)的五(wu)種(zhong)成(cheng)象規律

　　1. 當物**于透鏡物方(fang)二倍焦距(ju)以(yi)(yi)外時，則在象(xiang)方(fang)二倍焦距(ju)以(yi)(yi)內、焦點以(yi)(yi)外形成縮小(xiao)的倒立實象(xiang)；

　　2. 當物**于(yu)透鏡物方(fang)二(er)倍焦(jiao)距(ju)上時，則在象方(fang)二(er)倍焦(jiao)距(ju)上形(xing)成同樣(yang)大小的倒(dao)立實象；

　　3. 當物**于(yu)透(tou)鏡物方二倍焦(jiao)距以內，焦(jiao)點(dian)以外時，則在象方二倍焦(jiao)距以外形成(cheng)放大的(de)倒立(li)實象；

　　4. 當物**于透(tou)鏡物方焦點(dian)上時，則象(xiang)方不能成象(xiang)；

　　5. 當物(wu)**于透鏡物(wu)方焦點以內時，則象(xiang)方也(ye)無象(xiang)的(de)形成(cheng)，而在透鏡物(wu)方的(de)同側比(bi)物(wu)體遠的(de)位(wei)置形成(cheng)放(fang)大的(de)直立虛(xu)象(xiang)。

　　二、 光學(xue)顯微鏡的成(cheng)象（幾何成(cheng)象）原理

　　只(zhi)有當物體對(dui)(dui)人眼的張角不(bu)小于某一值時，肉(rou)眼才能(neng)區(qu)別其各(ge)個細部，該量稱(cheng)為目視分(fen)辨率ε。在更佳條件下，即物體的照度(du)為50~70lx及其對(dui)(dui)比度(du)較大時，可達到(dao)1'。為易于觀(guan)測(ce)，一般將(jiang)該量加大到(dao)2'，并取(qu)此為平(ping)均目鏡分(fen)辨率。

　　物(wu)體視角的大小與(yu)該物(wu)體的長度(du)尺寸和物(wu)體至眼睛的距離有(you)關。有(you)公式y=Lε

　　距(ju)(ju)離(li)L不能取得很小，因為眼睛(jing)的調(diao)節(jie)能力有一定限(xian)度，尤(you)(you)(you)其是眼睛(jing)在接近調(diao)節(jie)能力的尤(you)(you)(you)限(xian)范圍工作時，會使視(shi)力尤(you)(you)(you)度疲勞。對于標準(zhun)(正視(shi))而(er)言(yan)，更佳(jia)的視(shi)距(ju)(ju)規定為250mm(明視(shi)距(ju)(ju)離(li))。這意味著(zhu)，在沒有儀器的條件(jian)下，目視(shi)分辨率(lv)ε=2'的眼睛(jing)，能清楚地區分大小為0.15mm的物(wu)體細節(jie)。

　　在觀(guan)測視角(jiao)小于1'的物體時，要使(shi)用放(fang)(fang)大儀器。放(fang)(fang)大鏡和顯微(wei)鏡是用于觀(guan)測放(fang)(fang)置在觀(guan)測人員近處應予放(fang)(fang)大的物體的。

　　（一） 放大鏡的(de)成像(xiang)原理

　　表(biao)面(mian)為曲面(mian)的(de)玻(bo)璃或其他透明材料制成(cheng)(cheng)的(de)光(guang)學透鏡可以使物體(ti)放大成(cheng)(cheng)像，光(guang)路(lu)圖(tu)如圖(tu)1所示(shi)。位于物方焦(jiao)點(dian)F以內的(de)物AB，其大小(xiao)為y，它被放大鏡成(cheng)(cheng)一大小(xiao)為y'的(de)虛像A'B'。

　　放大鏡的放大率

　　Γ=250/f'

　　式中250--明視距離，單位為mm

　　f'--放大鏡焦距，單位為mm

　　該放(fang)大率是(shi)指在250mm的(de)(de)距(ju)離內用放(fang)大鏡觀察到(dao)的(de)(de)物體(ti)像(xiang)的(de)(de)視(shi)角同沒有(you)放(fang)大鏡觀察到(dao)的(de)(de)物體(ti)視(shi)角的(de)(de)比值。

　　（二） 顯(xian)微鏡的成像(xiang)原理

　　顯微鏡(jing)和放(fang)大鏡(jing)起著同樣(yang)的作用，就是(shi)把近(jin)處的微小物體成(cheng)一放(fang)大的像(xiang)，以(yi)供人眼觀察。只(zhi)是(shi)顯微鏡(jing)比放(fang)大鏡(jing)可以(yi)具有(you)更高的放(fang)大率而已。

　　圖(tu)(tu)2是(shi)物(wu)(wu)(wu)體(ti)被顯微鏡(jing)(jing)(jing)成(cheng)像(xiang)的(de)(de)(de)原理圖(tu)(tu)。圖(tu)(tu)中為(wei)方便計，把物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)L1和目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)L2均以單塊透鏡(jing)(jing)(jing)表(biao)示。物(wu)(wu)(wu)體(ti)AB位(wei)(wei)于(yu)(yu)物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)前方，離(li)開物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)距離(li)大于(yu)(yu)物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)焦(jiao)距，但小于(yu)(yu)兩倍物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)焦(jiao)距。所(suo)以，它(ta)經(jing)物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)以后，必然(ran)形(xing)成(cheng)一(yi)個倒立的(de)(de)(de)放(fang)(fang)大的(de)(de)(de)實(shi)像(xiang)A'B'。 A'B'位(wei)(wei)于(yu)(yu)目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)物(wu)(wu)(wu)方焦(jiao)點F2上(shang)，或者(zhe)在(zai)很靠近(jin)F2的(de)(de)(de)位(wei)(wei)置上(shang)。再(zai)經(jing)目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)放(fang)(fang)大為(wei)虛(xu)像(xiang)A''B''后供眼睛(jing)觀察。虛(xu)像(xiang)A''B''的(de)(de)(de)位(wei)(wei)置取(qu)決于(yu)(yu)F2和A'B'之間的(de)(de)(de)距離(li)，可以在(zai)無限(xian)遠處（當A'B'位(wei)(wei)于(yu)(yu)F2上(shang)時），也可以在(zai)觀察者(zhe)的(de)(de)(de)明視距離(li)處（當A'B'在(zai)圖(tu)(tu)中焦(jiao)點F2之右(you)邊(bian)時）。目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)作用與(yu)放(fang)(fang)大鏡(jing)(jing)(jing)一(yi)樣(yang)。所(suo)不同的(de)(de)(de)只是(shi)眼睛(jing)通過目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)所(suo)看到的(de)(de)(de)不是(shi)物(wu)(wu)(wu)體(ti)本身，而是(shi)物(wu)(wu)(wu)體(ti)被物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)所(suo)成(cheng)的(de)(de)(de)已(yi)經(jing)放(fang)(fang)大了一(yi)次(ci)的(de)(de)(de)像(xiang)。

　　（三） 顯微鏡(jing)的重要(yao)光(guang)學技術參(can)數

　　在鏡(jing)檢時，人們總是希望能(neng)清晰而明亮的理想圖象(xiang)，這就需要(yao)顯微鏡(jing)的各(ge)項光學技(ji)術參數達到(dao)一定的標準，并且要(yao)求在使用時，要(yao)根(gen)據鏡(jing)檢的目的和實(shi)際情況來協調各(ge)參數的關系。只有(you)(you)這樣，才能(neng)充分發揮(hui)顯微鏡(jing)應有(you)(you)的性(xing)能(neng)，得到(dao)滿意的鏡(jing)檢效果。

　　顯微鏡的(de)光學技術(shu)參數包括：數值孔徑(jing)、分辨率(lv)、放(fang)大率(lv)、焦深、視場寬度(du)、覆蓋差、工作(zuo)距(ju)離(li)等等。這些參數并不都是越高(gao)越好，它們之(zhi)間是相互聯系又相互制約的(de)，在使用時，應根據鏡檢的(de)目的(de)和實際情況(kuang)來協調參數間的(de)關(guan)系，但應以保證分辨率(lv)為準。

　　1． 數值孔徑

　　數(shu)值(zhi)孔徑(jing)簡寫(xie)NA，數(shu)值(zhi)孔徑(jing)是物(wu)鏡和(he)聚光鏡的主要技術參(can)數(shu)，是判斷(duan)兩者(zhe)（尤其對物(wu)鏡而言(yan)）性能高低的重(zhong)要標志。其數(shu)值(zhi)的大(da)小(xiao)，分(fen)別標刻在物(wu)鏡和(he)聚光鏡的外殼上。

　　數值孔徑（NA）是物(wu)鏡(jing)前透鏡(jing)與被(bei)檢物(wu)體之間介(jie)質的(de)折射(she)率（n）和孔徑角（u）半(ban)數的(de)正(zheng)弦之乘積。用公式(shi)表示如下：NA=nsinu/2

　　孔(kong)徑(jing)角又稱"鏡(jing)(jing)口角"，是物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)光軸上的(de)物(wu)(wu)體(ti)點與(yu)物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)前透鏡(jing)(jing)的(de)有(you)效直徑(jing)所形(xing)成(cheng)的(de)角度。孔(kong)徑(jing)角越大，進入物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)的(de)光通亮就越大，它與(yu)物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)的(de)有(you)效直徑(jing)成(cheng)正(zheng)比，與(yu)焦點的(de)距離成(cheng)反比。

　　顯(xian)微鏡觀察時(shi)，若想增(zeng)大NA值(zhi)(zhi)，孔徑角是無法增(zeng)大的，**的辦法是增(zeng)大介質的折射(she)率n值(zhi)(zhi)。基(ji)于這一原理(li)，就產生(sheng)了水(shui)浸(jin)物鏡和油浸(jin)物鏡，因(yin)介質的折射(she)率n值(zhi)(zhi)大于1，NA值(zhi)(zhi)就能大于1。

　　數值(zhi)孔徑更大值(zhi)為1.4，這個數值(zhi)在理論上和技(ji)術(shu)上都達到了尤限(xian)。目前(qian)，有用折(zhe)射率高的(de)溴萘(nai)作介質，溴萘(nai)的(de)折(zhe)射率為1.66,所以NA值(zhi)可(ke)大于1.4。

　　這(zhe)里要指出，為了(le)充分發揮(hui)物鏡(jing)數值孔(kong)徑的作用，在(zai)觀察時，聚(ju)光鏡(jing)的NA值應(ying)等于(yu)或略大于(yu)物鏡(jing)的NA值。

　　數值(zhi)孔(kong)徑與其他技術參數有著(zhu)密切的(de)關系，它幾乎(hu)決定(ding)和影(ying)響著(zhu)其他各項技術參數。它與分辨率(lv)(lv)成(cheng)正(zheng)比(bi)，與放大(da)率(lv)(lv)成(cheng)正(zheng)比(bi)，與焦(jiao)深(shen)成(cheng)反比(bi)，NA值(zhi)增大(da)，視場寬度(du)與工(gong)作距離(li)都會相應地變小。

　　2． 分辨率

　　顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰(xi)區分的兩個物點的更小(xiao)間距，又(you)稱"鑒別率"。其計(ji)算公式是σ=λ/NA

　　式中σ為更小分(fen)辨(bian)距(ju)離；λ為光(guang)線的波長；NA為物(wu)(wu)鏡的數值孔(kong)徑。可(ke)見物(wu)(wu)鏡的分(fen)辨(bian)率(lv)是(shi)由物(wu)(wu)鏡的NA值與照明光(guang)源的波長兩個(ge)因素決定。NA值越大，照明光(guang)線波長越短(duan)，則(ze)σ值越小，分(fen)辨(bian)率(lv)就越高。

　　要提高分辨率，即減小σ值，可采取以下措施

　　（1） 降低波長(chang)λ值，使用短波長(chang)光源(yuan)。

　　（2） 增大介質n值(zhi)以(yi)提高(gao)NA值(zhi)（NA=nsinu/2）。

　　（3） 增大孔(kong)徑角u值(zhi)以提高NA值(zhi)。

　　（4） 增加明暗反差。

　　3． 放(fang)大(da)率(lv)和有(you)效(xiao)放(fang)大(da)率(lv)

　　由于經過物鏡(jing)(jing)和(he)目鏡(jing)(jing)的兩次放大(da)，所以顯微鏡(jing)(jing)總的放大(da)率(lv)(lv)Γ應該(gai)是物鏡(jing)(jing)放大(da)率(lv)(lv)β和(he)目鏡(jing)(jing)放大(da)率(lv)(lv)Γ1的乘積(ji)：

　　Γ=βΓ1

　　顯然(ran)，和放(fang)(fang)大鏡(jing)(jing)相比(bi)，顯微鏡(jing)(jing)可以具有高得多的放(fang)(fang)大率(lv)，并且通過調換不同放(fang)(fang)大率(lv)的物(wu)鏡(jing)(jing)和目鏡(jing)(jing)，能(neng)夠方(fang)便地改變顯微鏡(jing)(jing)的放(fang)(fang)大率(lv)。

　　放大率(lv)也(ye)(ye)是顯微鏡的(de)重要(yao)參(can)數，但也(ye)(ye)不(bu)能盲(mang)目相信放大率(lv)越高(gao)越好。顯微鏡放大倍(bei)率(lv)的(de)尤(you)限即有效(xiao)放大倍(bei)率(lv)。

　　分(fen)辨率和放(fang)大(da)倍率是兩個不同的(de)但(dan)又(you)互(hu)有聯(lian)系(xi)的(de)概(gai)念。有關(guan)系(xi)式：500NA<Γ&lt;1000NA

　　當選用的(de)物鏡數值孔徑(jing)不夠大(da)，即分辨(bian)(bian)率(lv)不夠高(gao)時(shi)，顯(xian)微(wei)鏡不能分清物體的(de)微(wei)細結構，此(ci)時(shi)即使過度地增大(da)放(fang)(fang)大(da)倍率(lv)，得(de)到的(de)也(ye)只能是一個輪廓雖大(da)但(dan)細節不清的(de)圖像，稱為無效放(fang)(fang)大(da)倍率(lv)。反之(zhi)如果分辨(bian)(bian)率(lv)已(yi)滿足要(yao)求(qiu)而(er)放(fang)(fang)大(da)倍率(lv)不足，則(ze)顯(xian)微(wei)鏡雖已(yi)具備分辨(bian)(bian)的(de)能力，但(dan)因圖像太小而(er)仍然(ran)不能被(bei)人眼(yan)清晰視(shi)見。所以為了充分發揮顯(xian)微(wei)鏡的(de)分辨(bian)(bian)能力，應使數值孔徑(jing)與顯(xian)微(wei)鏡總(zong)放(fang)(fang)大(da)倍率(lv)合(he)理匹配。

　　4． 焦深

　　焦(jiao)(jiao)(jiao)深為焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)(dian)(dian)深度的(de)簡稱，即在(zai)使用顯微鏡時，當焦(jiao)(jiao)(jiao)點(dian)(dian)(dian)對準某一物(wu)體時，不(bu)僅位(wei)于(yu)該點(dian)(dian)(dian)平(ping)面上(shang)的(de)各(ge)點(dian)(dian)(dian)都(dou)可以(yi)看(kan)清楚(chu)，而(er)且在(zai)此平(ping)面的(de)上(shang)下(xia)(xia)一定厚度內，也能看(kan)得清楚(chu)，這(zhe)個清楚(chu)部(bu)分的(de)厚度就是焦(jiao)(jiao)(jiao)深。焦(jiao)(jiao)(jiao)深大, 可以(yi)看(kan)到被檢(jian)物(wu)體的(de)全層(ceng)，而(er)焦(jiao)(jiao)(jiao)深小，則只(zhi)能看(kan)到被檢(jian)物(wu)體的(de)一薄層(ceng)，焦(jiao)(jiao)(jiao)深與其他技術(shu)參數有(you)以(yi)下(xia)(xia)關系：

　　（1） 焦深與總放大倍數(shu)及(ji)物鏡的數(shu)值孔徑成(cheng)反(fan)比。

　　（2） 焦深(shen)大，分辨率降低(di)。

　　由于低(di)倍(bei)物(wu)鏡的(de)景(jing)深較大，所以在低(di)倍(bei)物(wu)鏡照相(xiang)時(shi)造成困難。在顯(xian)微照相(xiang)時(shi)將(jiang)詳細介紹。

　　5． 視場(chang)直徑（Field Of View）

　　觀察顯微鏡時，所看到的(de)明(ming)亮(liang)的(de)圓形范圍叫視場，它(ta)的(de)大小是由目鏡里的(de)視場光闌決定的(de)。

　　視場(chang)(chang)直徑也稱視場(chang)(chang)寬(kuan)度，是指在(zai)顯微鏡下看到的圓形(xing)視場(chang)(chang)內所能容納被檢物體的實際(ji)范圍。視場(chang)(chang)直徑愈大，愈便于觀(guan)察(cha)。

　　有(you)公式 F=FN/β

　　式中F: 視場直徑，FN：視場數（Field Number, 簡寫為FN，標刻(ke)在目鏡的鏡筒外側），β:物鏡放大率。

　　由公式可看出：

　　（1） 視場(chang)直徑與(yu)視場(chang)數成正比。

　　（2） 增大物(wu)(wu)鏡的(de)(de)倍數(shu)，則視場直(zhi)徑減小。因此(ci)，若在低倍鏡下可以看到(dao)被檢物(wu)(wu)體的(de)(de)全貌(mao)，而(er)換成高倍物(wu)(wu)鏡，就只能看到(dao)被檢物(wu)(wu)體的(de)(de)很(hen)小一部份。

　　6． 覆蓋差

　　顯微鏡(jing)(jing)的(de)(de)光學(xue)系統也包括蓋(gai)(gai)玻片(pian)在(zai)內。由于蓋(gai)(gai)玻片(pian)的(de)(de)厚度不標準，光線從(cong)蓋(gai)(gai)玻片(pian)進入空氣產生(sheng)(sheng)折射后的(de)(de)光路發生(sheng)(sheng)了改變，從(cong)而產生(sheng)(sheng)了相差，這就是覆蓋(gai)(gai)差。覆蓋(gai)(gai)差的(de)(de)產生(sheng)(sheng)影(ying)響(xiang)了顯微鏡(jing)(jing)的(de)(de)成響(xiang)質量。

　　國際(ji)上規定，蓋(gai)玻片的標準厚度(du)為0.17mm，許可范圍(wei)在0.16-0.18mm，在物鏡(jing)(jing)的制造上已將此厚度(du)范圍(wei)的相差計算在內(nei)。物鏡(jing)(jing)外(wai)殼(ke)上標的0.17，即表明該(gai)物鏡(jing)(jing)所要求的蓋(gai)玻片的厚度(du)。

　　7． 工作(zuo)距離WD

　　工(gong)作距(ju)(ju)離(li)也叫物距(ju)(ju)，即(ji)指物鏡前透鏡的(de)表面到被(bei)檢物體之(zhi)間(jian)的(de)距(ju)(ju)離(li)。鏡檢時(shi)(shi)，被(bei)檢物體應處(chu)在物鏡的(de)一(yi)倍至二倍焦距(ju)(ju)之(zhi)間(jian)。因此(ci)，它與焦距(ju)(ju)是(shi)兩個概念，平時(shi)(shi)習(xi)慣所說的(de)調焦，實際上是(shi)調節工(gong)作距(ju)(ju)離(li)。

　　在物(wu)鏡數值孔(kong)徑一定的(de)情況下，工作距離(li)短孔(kong)徑角則大。

　　數值孔徑(jing)大(da)的高倍物鏡，其工作距離小。

　　（四） 物鏡

　　物(wu)鏡(jing)是顯微(wei)鏡(jing)更重要的(de)(de)光學部(bu)件，利用光線使被檢物(wu)體**次成象(xiang)，因(yin)而(er)直(zhi)接關系和影響成象(xiang)的(de)(de)質(zhi)量(liang)(liang)和各項光學技術參數，是衡量(liang)(liang)一臺(tai)顯微(wei)鏡(jing)質(zhi)量(liang)(liang)的(de)(de)首(shou)要標(biao)準。

　　物(wu)(wu)鏡(jing)的(de)(de)結構(gou)復雜，制作精密，由(you)于對(dui)象差的(de)(de)校正，金屬的(de)(de)物(wu)(wu)鏡(jing)筒內由(you)相隔(ge)一定(ding)距(ju)離(li)并(bing)被固定(ding)的(de)(de)透鏡(jing)組組合(he)而成(cheng)。物(wu)(wu)鏡(jing)有許多具體的(de)(de)要求，如合(he)軸,齊焦。

　　齊焦既是(shi)在鏡(jing)檢(jian)時，當(dang)用某一(yi)(yi)倍率的(de)(de)物鏡(jing)觀察圖象(xiang)清晰后，在轉換另一(yi)(yi)倍率的(de)(de)物鏡(jing)時，其成象(xiang)亦應(ying)基本清晰，而且象(xiang)的(de)(de)中心偏離也(ye)應(ying)該在一(yi)(yi)定的(de)(de)范(fan)圍內，也(ye)就是(shi)合(he)軸(zhou)程度。齊焦性能的(de)(de)優劣和合(he)軸(zhou)程度的(de)(de)高(gao)低(di)是(shi)顯微(wei)鏡(jing)

　　質(zhi)量的(de)(de)一個(ge)重要標(biao)志，它是與物鏡(jing)的(de)(de)本身質(zhi)量和物鏡(jing)轉換器的(de)(de)精度有關。

　　現(xian)代(dai)顯微(wei)物鏡已達到高度完善(shan)，其數值孔(kong)徑已接近(jin)尤(you)限(xian)，視場中心(xin)的(de)分辨(bian)率(lv)與理論值之(zhi)區別已微(wei)乎其微(wei)。但繼續增大顯微(wei)物鏡視場與提高視場邊緣(yuan)成象質量(liang)的(de)可能性仍(reng)然存在，這種研究(jiu)工(gong)作(zuo)，至今仍(reng)在進(jin)行。

　　顯(xian)微物(wu)鏡與(yu)(yu)目(mu)鏡在(zai)參于(yu)成象這點上是有(you)區別(bie)的。物(wu)鏡是顯(xian)微鏡更復(fu)雜和(he)更重要的部分，在(zai)寬光(guang)束(shu)中(zhong)工作(zuo)(孔徑大)，但這些光(guang)束(shu)與(yu)(yu)光(guang)軸的傾(qing)角(jiao)較小(xiao)(視場小(xiao))；目(mu)鏡在(zai)窄(zhai)光(guang)束(shu)中(zhong)工作(zuo)，但其(qi)傾(qing)角(jiao)大（視場大）。當計算物(wu)鏡與(yu)(yu)目(mu)鏡，在(zai)消除(chu)象差上有(you)很(hen)大差別(bie)。

　　與寬光(guang)束(shu)有關(guan)的象(xiang)差(cha)(cha)(cha)是球(qiu)差(cha)(cha)(cha)、慧差(cha)(cha)(cha)以及位置色差(cha)(cha)(cha)；與視場(chang)有關(guan)的象(xiang)差(cha)(cha)(cha)是象(xiang)散、場(chang)曲、畸(ji)變(bian)以及倍率包差(cha)(cha)(cha)。

　　顯微物鏡是一消(xiao)球差系統。這意(yi)味著(zhu)：就軸上的一對(dui)共軛點(dian)而(er)言，消(xiao)除了球差并且實現了正(zheng)弦(xian)條件時，每一物鏡僅(jin)有兩(liang)個這種消(xiao)球差點(dian)。因(yin)此，物體(ti)與象的計算位置(zhi)的任何改變均導致(zhi)象差變大。

　　1． 物鏡(jing)的主要(yao)參數

　　（1） 放大(da)率β

　　（2） 數值孔徑(jing)NA

　　（3） 機械筒長L：在顯(xian)微鏡(jing)中，物鏡(jing)支承面(mian)到目(mu)鏡(jing)支承面(mian)之間的距離稱(cheng)為機械筒長。對于一臺顯(xian)微鏡(jing)來說(shuo)，機械筒長是(shi)固定的。我國規定機械筒長是(shi)160毫米(mi)。

　　（4） 蓋玻片厚度d

　　（5） 工作距(ju)離WD

　　這(zhe)些參數，大多刻在物(wu)鏡(jing)筒(tong)上(shang)，如圖3所示。

　　有一種所(suo)謂(wei)筒(tong)長無(wu)限的(de)顯微物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)，這(zhe)種物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)后方一般(ban)帶有輔(fu)助物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)（也叫補(bu)償物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)或鏡(jing)(jing)(jing)筒(tong)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)），被(bei)觀察物(wu)(wu)(wu)(wu)體位(wei)于物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)前焦點上，經過物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)以(yi)后，成像在無(wu)限遠，再經過輔(fu)助物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)成像在輔(fu)助物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)焦平(ping)面上，如(ru)圖4所(suo)示。在物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)和輔(fu)助物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)之間是(shi)平(ping)行光，所(suo)以(yi)中間距離比較自由(you)一些(xie)，可以(yi)加入(ru)棱(leng)鏡(jing)(jing)(jing)等光學元件。

　　2． 物(wu)鏡的基本類型

　　（1） 按顯微鏡鏡筒(tong)(tong)長(chang)度(du)（以mm計）：透射(she)(she)光用160鏡筒(tong)(tong)，帶0.17mm厚或更厚的蓋玻片；反射(she)(she)光用190鏡筒(tong)(tong)，不(bu)帶蓋玻片；透射(she)(she)光與反射(she)(she)光用鏡筒(tong)(tong)，筒(tong)(tong)長(chang)無限大。

　　（2） 按(an)浸(jin)(jin)法(fa)特征：非浸(jin)(jin)式(shi)(干式(shi))、浸(jin)(jin)式(shi)(油(you)浸(jin)(jin)、水浸(jin)(jin)、甘(gan)油(you)浸(jin)(jin)及(ji)其它浸(jin)(jin)法(fa))。

　　（3） 按(an)光(guang)學裝置：透射式(shi)(shi)、反射式(shi)(shi)以及折反射式(shi)(shi)。

　　（4） 按數(shu)值孔徑和放大倍(bei)數(shu)：低倍(bei)(NA≤0.2與(yu)β≤10X)，中倍(bei)(NA≤0.65與(yu)β≤40X)，高倍(bei)(NA＞0.65與(yu)β＞40X)。

　　（5） 按校正象差(cha)的情況(kuang)不同，通常分為消色差(cha)物(wu)鏡，半復(fu)消色差(cha)物(wu)鏡，復(fu)消色差(cha)物(wu)鏡，平視(shi)場(chang)(chang)消色差(cha)物(wu)鏡，平視(shi)場(chang)(chang)復(fu)消色差(cha)物(wu)鏡和單色物(wu)鏡。

　　a. 消色差(cha)物鏡（Achromatic objective）

　　這是應用(yong)更(geng)廣泛的一(yi)類顯微物鏡(jing)，外殼上(shang)常有"Ach"字(zi)樣(yang)。它校正(zheng)了軸上(shang)點(dian)的位置(zhi)色(se)(se)差（紅，藍二(er)色(se)(se)）、球(qiu)差（黃綠(lv)光）和(he)正(zheng)弦差，保持(chi)了齊(qi)明條件。軸外點(dian)的象(xiang)散不(bu)超過允許(xu)值(－4屬(shu)光度)，二(er)級光譜未校正(zheng)。

　　數值孔(kong)徑為0.1~0.15的(de)低倍(bei)(bei)消色差(cha)物(wu)鏡(jing)(jing)一般(ban)由兩(liang)片透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)膠合在一起的(de)雙(shuang)膠物(wu)鏡(jing)(jing)構成。數值孔(kong)徑至0.2的(de)消色差(cha)物(wu)鏡(jing)(jing)由兩(liang)組(zu)雙(shuang)膠透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)構成。當數值孔(kong)徑增大到(dao)0.3時，再加入(ru)一平(ping)凸(tu)透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)，該平(ping)凸(tu)透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)決(jue)定著物(wu)鏡(jing)(jing)的(de)焦距，而(er)其它透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)則補(bu)償由其平(ping)面(mian)與球面(mian)產生(sheng)的(de)象(xiang)差(cha)。高倍(bei)(bei)物(wu)鏡(jing)(jing)的(de)平(ping)面(mian)象(xiang)差(cha)可用浸法消除(chu)。高倍(bei)(bei)消色差(cha)物(wu)鏡(jing)(jing)一般(ban)均為浸式，由四部(bu)分構成：前(qian)片透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)、新月形透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)及兩(liang)個雙(shuang)膠透(tou)(tou)鏡(jing)(jing)組(zu)。

　　b. 復消色(se)差物鏡（Apochromatic objective）

　　這(zhe)類(lei)物鏡(jing)(jing)的結構復雜，透鏡(jing)(jing)采(cai)用(yong)(yong)了(le)特種玻(bo)璃或螢石(shi)等(deng)材料(liao)制作而成(cheng)，物鏡(jing)(jing)的外(wai)殼(ke)上(shang)標有(you)"Apo"字樣(yang)。它對兩個色(se)光實(shi)現了(le)正(zheng)(zheng)(zheng)弦條件，要求嚴格地校(xiao)正(zheng)(zheng)(zheng)軸(zhou)上(shang)點的位置色(se)差(cha)（紅，藍二(er)色(se)）、球差(cha)（紅，藍二(er)色(se)）和正(zheng)(zheng)(zheng)弦差(cha)，同(tong)時(shi)要求校(xiao)正(zheng)(zheng)(zheng)二(er)級光譜（再(zai)校(xiao)正(zheng)(zheng)(zheng)綠光的位置色(se)差(cha)）。其倍率色(se)差(cha)并不能完全校(xiao)正(zheng)(zheng)(zheng)，一般(ban)須用(yong)(yong)目鏡(jing)(jing)補(bu)償。

　　由于對各種象差的校正尤為完善(shan)，比響應倍率的消(xiao)色差物鏡(jing)有更(geng)(geng)大(da)的數值孔徑(jing)，這樣不(bu)僅分(fen)辨率高(gao)，象質(zhi)量優(you)而且也有更(geng)(geng)高(gao)的有效(xiao)放大(da)率。因此(ci)，復(fu)消(xiao)色差物鏡(jing)的性能很(hen)高(gao)，適用于**研究鏡(jing)檢和顯微照相。

　　c. 半復(fu)消(xiao)色(se)差物鏡（Semi apochromatic objective）

　　半復消色(se)差(cha)(cha)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)又稱氟石物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)，物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)的(de)外殼上標有"FL"字樣。在結構上透(tou)鏡(jing)的(de)數目比消色(se)差(cha)(cha)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)多，比復消色(se)差(cha)(cha)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)少，成(cheng)象(xiang)質量上，遠較(jiao)消色(se)差(cha)(cha)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)為(wei)好，接近于(yu)復消色(se)差(cha)(cha)物(wu)(wu)(wu)(wu)鏡(jing)。

　　d. 平視場物鏡（Plan objective ）

　　平(ping)場(chang)物(wu)鏡(jing)(jing)是在物(wu)鏡(jing)(jing)的透鏡(jing)(jing)系統中增加一快半月(yue)形的厚透鏡(jing)(jing)，以達到校正場(chang)曲的缺(que)陷，提高視(shi)(shi)場(chang)邊緣成(cheng)像質量(liang)的目(mu)的。平(ping)場(chang)物(wu)鏡(jing)(jing)的視(shi)(shi)場(chang)平(ping)坦，更適用于鏡(jing)(jing)檢和顯微照相(xiang)。對于平(ping)視(shi)(shi)場(chang)消(xiao)色(se)差(cha)(cha)(cha)物(wu)鏡(jing)(jing)，其倍(bei)率色(se)差(cha)(cha)(cha)不大，不必用特殊(shu)目(mu)鏡(jing)(jing)補償(chang)。而平(ping)視(shi)(shi)場(chang)復(fu)消(xiao)色(se)差(cha)(cha)(cha)物(wu)鏡(jing)(jing)，則要用目(mu)鏡(jing)(jing)來補償(chang)它的倍(bei)率色(se)差(cha)(cha)(cha)。

　　e. 單色物鏡

　　這類物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)由石(shi)英(ying)、熒石(shi)或氟化鋰制(zhi)的(de)(de)(de)一(yi)組(zu)單片透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)構成。只能在(zai)紫外(wai)線光譜區(qu)(qu)的(de)(de)(de)個別區(qu)(qu)內使用(寬度不超過20mm)，可(ke)見光譜區(qu)(qu)不能采用單色物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)。這類物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)均制(zhi)成反射(she)(she)式(shi)與(yu)折(zhe)反射(she)(she)式(shi)系統。主(zhu)要(yao)缺(que)點是相當大(da)一(yi)部(bu)分光束(shu)在(zai)中(zhong)心被遮蔽(入(ru)瞳(tong)面積(ji)(ji)的(de)(de)(de)25%)。在(zai)新(xin)型折(zhe)反射(she)(she)系統中(zhong)，由于采用半透明反射(she)(she)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)以(yi)及物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)膠合結(jie)構，使這一(yi)缺(que)點大(da)為(wei)減輕，從而可(ke)以(yi)取消(xiao)反射(she)(she)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)框的(de)(de)(de)遮光。并且兩同(tong)軸反射(she)(she)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)殘余象差是互相補償的(de)(de)(de)，同(tong)時用透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)組(zu)來增大(da)數值孔(kong)徑。若系統的(de)(de)(de)校正滿(man)意(yi)，孔(kong)徑達到(dao)NA=1.4時，中(zhong)心遮蔽可(ke)不超過入(ru)瞳(tong)面積(ji)(ji)的(de)(de)(de)4%。

　　f. 特種物鏡

　　所(suo)謂(wei)"特(te)種物鏡(jing)"是(shi)在上述(shu)物鏡(jing)的基礎上，專門為達到某些特(te)定的觀察效果而(er)設計制造的。主要有以下幾(ji)種：

　　(a) 帶校正環(huan)物鏡（Correction collar objective）

　　在(zai)(zai)物(wu)鏡(jing)的(de)(de)中部裝有(you)環(huan)裝的(de)(de)調節(jie)(jie)環(huan)，當轉動調節(jie)(jie)環(huan)時，可(ke)(ke)調節(jie)(jie)物(wu)鏡(jing)內透鏡(jing)組之間(jian)的(de)(de)距離(li)，從而(er)校(xiao)正(zheng)由蓋(gai)玻片(pian)(pian)厚度(du)不(bu)標準(zhun)引起的(de)(de)覆蓋(gai)差。調節(jie)(jie)環(huan)上的(de)(de)刻度(du)可(ke)(ke)從0 .11--.023,在(zai)(zai)物(wu)鏡(jing)的(de)(de)外殼上也標科(ke)有(you)此(ci)數字(zi)，表明(ming)可(ke)(ke)校(xiao)正(zheng)蓋(gai)玻片(pian)(pian)從0.11-0.23mm厚度(du)之間(jian)的(de)(de)誤(wu)差。

　　(b) 帶虹彩光闌的物鏡（Iris diaphragm objective）

　　在物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)鏡(jing)(jing)(jing)筒(tong)內的(de)(de)(de)上部裝有虹彩(cai)光(guang)闌(lan)，外(wai)方(fang)也可以旋轉的(de)(de)(de)調(diao)節(jie)(jie)(jie)環，轉動時(shi)可調(diao)節(jie)(jie)(jie)光(guang)闌(lan)孔徑的(de)(de)(de)大小，這種結構(gou)的(de)(de)(de)物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)是**的(de)(de)(de)油浸(jin)物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)，它(ta)的(de)(de)(de)作用是在暗(an)視場鏡(jing)(jing)(jing)檢時(shi)，往往由(you)于某些原(yuan)因而使(shi)(shi)照明光(guang)線進入物(wu)(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)，使(shi)(shi)視場背(bei)(bei)景不夠黑(hei)(hei)暗(an)，造成鏡(jing)(jing)(jing)檢質(zhi)量的(de)(de)(de)下降(jiang)。這時(shi)調(diao)節(jie)(jie)(jie)光(guang)闌(lan)的(de)(de)(de)大小，使(shi)(shi)背(bei)(bei)景變黑(hei)(hei)，使(shi)(shi)被(bei)檢物(wu)(wu)(wu)體更明亮(liang)，增強鏡(jing)(jing)(jing)檢效果(guo)。

　　(c) 相襯物鏡（Phase contrast objective）

　　這種物鏡是由(you)于(yu)相襯鏡檢(jian)術的專用物鏡，其特點(dian)是在物鏡的后焦平面(mian)處裝有相板。

　　(d) 無罩(zhao)物鏡（No cover objective）

　　有些(xie)被檢(jian)物(wu)體，如涂抹制片(pian)等，上面不能加用蓋玻片(pian)，這(zhe)樣在(zai)鏡檢(jian)時應使用無罩(zhao)物(wu)鏡，否則圖象質量將明(ming)(ming)顯下降，特別(bie)是在(zai)高倍鏡檢(jian)時更為明(ming)(ming)顯。這(zhe)種物(wu)鏡的外殼(ke)上常標(biao)刻NC，同時在(zai)蓋玻片(pian)厚度的位置上沒有0.17的字(zi)樣，而標(biao)刻著"0"。

　　(e) 長工(gong)作距(ju)離物(wu)鏡

　　這種物鏡是(shi)倒置(zhi)顯微鏡的(de)專用物鏡，它(ta)是(shi)為了滿足組織培養(yang)，懸浮液等材料(liao)的(de)鏡檢而設計(ji)。

　　（五） 目鏡

　　目(mu)鏡(jing)(jing)的(de)(de)作用是(shi)把物(wu)鏡(jing)(jing)放大的(de)(de)實(shi)象（中(zhong)間象）再放大一級，并把物(wu)象映入觀(guan)察者的(de)(de)眼中(zhong)，實(shi)質上目(mu)鏡(jing)(jing)就是(shi)一個放大鏡(jing)(jing)。已知(zhi)顯微鏡(jing)(jing)的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)辨率能(neng)力是(shi)由(you)物(wu)鏡(jing)(jing)的(de)(de)數值孔徑所決定的(de)(de)，而目(mu)鏡(jing)(jing)只是(shi)起放大作用。因此，對于物(wu)鏡(jing)(jing)不能(neng)分(fen)(fen)(fen)辨出(chu)的(de)(de)結構，目(mu)鏡(jing)(jing)放的(de)(de)再大，也(ye)仍(reng)然不能(neng)分(fen)(fen)(fen)辨出(chu)。

　　（六） 聚光鏡

　　聚(ju)光(guang)鏡(jing)裝在載物(wu)臺的(de)(de)(de)下方。小型(xing)的(de)(de)(de)顯(xian)微鏡(jing)往往無聚(ju)光(guang)鏡(jing)，在使(shi)用數值孔徑0.40以上的(de)(de)(de)物(wu)鏡(jing)時，則(ze)要具有聚(ju)光(guang)鏡(jing)。聚(ju)光(guang)鏡(jing)不(bu)僅(jin)可以彌(mi)補光(guang)量的(de)(de)(de)不(bu)足和適當改變從光(guang)源射(she)來(lai)的(de)(de)(de)光(guang)的(de)(de)(de)性質，而且將光(guang)線聚(ju)焦于(yu)被(bei)檢物(wu)體(ti)上，以得到更好的(de)(de)(de)照明效(xiao)果。

　　聚(ju)光鏡(jing)(jing)的(de)的(de)結構有(you)多種(zhong)，同(tong)時(shi)根據物鏡(jing)(jing)數(shu)值孔(kong)徑的(de)大小，相應地(di)對聚(ju)光鏡(jing)(jing)的(de)要求也不同(tong) 。

　　1． 阿貝聚光鏡(jing)（Abbe condenser）

　　這是由德國光(guang)(guang)學(xue)大學(xue)大師恩斯特.阿(a)貝(bei)(Ernst Abbe)設計。阿(a)貝(bei)聚(ju)光(guang)(guang)鏡(jing)由兩(liang)片透鏡(jing)組(zu)成，有較好(hao)的聚(ju)光(guang)(guang)能(neng)力(li)，但是在物鏡(jing)數值孔(kong)徑高于0.60時，則(ze)色差(cha)，球差(cha)就顯(xian)示(shi)出來。因此(ci)，多用(yong)于普通顯(xian)微鏡(jing)上(shang)。

　　2． 消(xiao)色差聚光(guang)鏡(Achromatic aplanatic condenser )

　　這(zhe)種聚(ju)(ju)光(guang)鏡(jing)(jing)又名"消(xiao)球(qiu)差聚(ju)(ju)光(guang)鏡(jing)(jing)"和"齊明(ming)聚(ju)(ju)光(guang)鏡(jing)(jing)"，它由一系(xi)列透鏡(jing)(jing)組成，它對色(se)差球(qiu)差的校正程度很(hen)高，能得到理(li)想(xiang)的圖象，是明(ming)場鏡(jing)(jing)檢中質(zhi)量更高的一種聚(ju)(ju)光(guang)鏡(jing)(jing)，其NA值達1.4 。因此，在**研究顯微鏡(jing)(jing)常配(pei)有此種聚(ju)(ju)光(guang)鏡(jing)(jing)。它不適(shi)用于4 X以下的低(di)倍物鏡(jing)(jing)，否則照明(ming)光(guang)源不能充滿(man)整個視場。

　　3． 搖(yao)出式聚光(guang)鏡（Swing out condenser）

　　在使用(yong)低倍物鏡(jing)時(shi)（如4X），由于視(shi)場大(da)，光(guang)源(yuan)所形(xing)成的(de)光(guang)錐不能(neng)充滿(man)真整個視(shi)場，造(zao)成視(shi)場邊緣部(bu)分黑暗，只中(zhong)央(yang)部(bu)分被照亮。要使視(shi)場充滿(man)照明，就需將聚光(guang)鏡(jing)的(de)上透鏡(jing)從光(guang)路中(zhong)搖出。

　　4． 其(qi)它聚光鏡

　　聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡除上(shang)述(shu)明(ming)場(chang)使(shi)用(yong)的(de)類(lei)型外，還有作(zuo)特殊用(yong)圖的(de)聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡。如暗視場(chang)聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡，相(xiang)襯(chen)聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡，偏光(guang)(guang)聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡，微分干涉聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡等，以上(shang)聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡分別適用(yong)于(yu)相(xiang)應的(de)觀(guan)察方(fang)式(shi)。

　　（七(qi)） 照明方法

　　顯(xian)(xian)微(wei)(wei)(wei)鏡(jing)的照(zhao)(zhao)明(ming)方法按其照(zhao)(zhao)明(ming)光(guang)束的形成，可分為"透(tou)射(she)式(shi)照(zhao)(zhao)明(ming)"，和"落(luo)射(she)式(shi)照(zhao)(zhao)明(ming)"兩大類。前(qian)者適用于透(tou)明(ming)或(huo)半透(tou)明(ming)的被(bei)(bei)檢(jian)物體，絕大數生(sheng)物顯(xian)(xian)微(wei)(wei)(wei)鏡(jing)屬于此(ci)類照(zhao)(zhao)明(ming)法；后者則(ze)適用于非透(tou)明(ming)的被(bei)(bei)檢(jian)物體，光(guang)源(yuan)來(lai)自(zi)上方，又稱(cheng)""反射(she)式(shi)照(zhao)(zhao)明(ming)"。主(zhu)要應(ying)用與金相顯(xian)(xian)微(wei)(wei)(wei)鏡(jing)或(huo)熒(ying)光(guang)鏡(jing)檢(jian)法。

　　1． 透射式照明(ming)

　　生物(wu)顯微鏡多用(yong)來(lai)觀察(cha)透明(ming)標本(ben)，需要(yao)以透射(she)光來(lai)照明(ming)。有(you)兩種(zhong)照明(ming)方式

　　（1） 臨(lin)界照(zhao)明(ming)(ming)（Critical illumination） 光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)經過(guo)聚(ju)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)鏡(jing)后，成像(xiang)(xiang)于(yu)物(wu)平面上(shang)，如(ru)圖(tu)5所示。若忽略光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)能(neng)的(de)(de)損失，則光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)像(xiang)(xiang)的(de)(de)亮度與光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)本(ben)身相同，因此(ci)，這種方法(fa)相當(dang)于(yu)在(zai)(zai)物(wu)平面上(shang)放(fang)置光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)。顯然(ran)，在(zai)(zai)臨(lin)界照(zhao)明(ming)(ming)中，如(ru)果(guo)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)表面亮度不均勻，或明(ming)(ming)顯地(di)表現出(chu)細小的(de)(de)結構，如(ru)燈絲等，那么就(jiu)要嚴(yan)重影(ying)響顯微鏡(jing)觀察效果(guo)，這是臨(lin)界照(zhao)明(ming)(ming)的(de)(de)缺(que)點(dian)。其補救的(de)(de)方法(fa)是在(zai)(zai)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)的(de)(de)前方放(fang)置乳白(bai)和吸熱濾色(se)片，使照(zhao)明(ming)(ming)變得較為(wei)均勻和避免光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)源(yuan)的(de)(de)長時(shi)間的(de)(de)照(zhao)射而損傷被檢物(wu)體。用透射光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)照(zhao)明(ming)(ming)時(shi)，物(wu)鏡(jing)成像(xiang)(xiang)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)束(shu)的(de)(de)孔(kong)徑角，被聚(ju)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)鏡(jing)像(xiang)(xiang)方光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)束(shu)的(de)(de)孔(kong)徑角所決定，為(wei)使物(wu)鏡(jing)的(de)(de)數值(zhi)孔(kong)徑得到充分利用，聚(ju)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)鏡(jing)應有與物(wu)鏡(jing)相同或稍大的(de)(de)數值(zhi)孔(kong)徑。

　　（2） 柯拉照(zhao)明(ming)(ming) 臨界照(zhao)明(ming)(ming)中(zhong)(zhong)物面(mian)光照(zhao)度不(bu)均勻的缺點，在柯拉照(zhao)明(ming)(ming)中(zhong)(zhong)可以(yi)消除。在光源(yuan)1與聚(ju)光鏡5之間加一輔(fu)助(zhu)聚(ju)光鏡2，如圖6所示(shi)。可見，由(you)于不(bu)是(shi)直接把光源(yuan)，而是(shi)把被光源(yuan)均勻照(zhao)明(ming)(ming)了的輔(fu)助(zhu)聚(ju)光鏡2（也稱為柯拉鏡）成像在標(biao)(biao)本6上，所以(yi)物鏡的視場（標(biao)(biao)本）得到(dao)均勻的照(zhao)明(ming)(ming)。

　　2． 落射式(shi)照明

　　在觀(guan)(guan)察不透明物(wu)體時(shi)，例(li)如(ru)通過金(jin)相顯微(wei)鏡觀(guan)(guan)察金(jin)屬(shu)磨(mo)片(pian)，往(wang)(wang)往(wang)(wang)是(shi)(shi)采用從側面或(huo)(huo)者從上面加以照明的(de)(de)方式。此時(shi)，被觀(guan)(guan)察物(wu)體的(de)(de)表面上沒有蓋(gai)玻璃片(pian)，標本像(xiang)的(de)(de)產生(sheng)是(shi)(shi)靠進入物(wu)鏡的(de)(de)反射或(huo)(huo)散射光線。如(ru)圖7所示。

　　3． 用暗視場(chang)來觀察微粒的照(zhao)明方法

　　用暗(an)視場(chang)方法可以觀察超(chao)顯(xian)微(wei)(wei)質(zhi)點。所謂超(chao)顯(xian)微(wei)(wei)質(zhi)點，是指那些小于(yu)顯(xian)微(wei)(wei)鏡分辨尤限的微(wei)(wei)小質(zhi)點。暗(an)視場(chang)照(zhao)明的原理是：不使主要(yao)的照(zhao)明光(guang)線(xian)進(jin)(jin)入物鏡，能夠(gou)進(jin)(jin)入物鏡成像的只是由微(wei)(wei)粒所散射的光(guang)線(xian)。

　　因此，在暗的(de)背景上(shang)給出了(le)亮的(de)微(wei)粒的(de)像，視場背景雖暗，但襯度(du)（對(dui)比）很好，可以(yi)使分辨率提高(gao)。

　　暗(an)視場照明又有單向和(he)雙向之分

　　（1） 單向暗(an)(an)視場(chang)照明(ming)(ming) 圖(tu)8是單向暗(an)(an)視場(chang)照明(ming)(ming)示意(yi)圖(tu)。由(you)圖(tu)可見，由(you)照明(ming)(ming)器2發出的(de)(de)(de)光(guang)線(xian)，經不(bu)透明(ming)(ming)的(de)(de)(de)標本片1反(fan)射后，主(zhu)要(yao)的(de)(de)(de)光(guang)線(xian)都沒有(you)進(jin)(jin)入物鏡3，進(jin)(jin)入物鏡的(de)(de)(de)光(guang)線(xian)主(zhu)要(yao)是由(you)微(wei)粒(li)或凸凹不(bu)平的(de)(de)(de)細部所散射的(de)(de)(de)光(guang)線(xian)。顯然，這種單向的(de)(de)(de)暗(an)(an)視場(chang)照明(ming)(ming)，對(dui)觀察(cha)微(wei)粒(li)的(de)(de)(de)存在(zai)和(he)運(yun)動是有(you)效的(de)(de)(de)，但對(dui)物體細節的(de)(de)(de)再現不(bu)是有(you)效的(de)(de)(de)，即(ji)存在(zai)"失真"的(de)(de)(de)現象。

　　（2） 雙(shuang)(shuang)向(xiang)(xiang)暗視場照明 雙(shuang)(shuang)向(xiang)(xiang)暗視場照明，可以消除(chu)單向(xiang)(xiang)所產(chan)生(sheng)的(de)失(shi)真(zhen)缺點(dian)。在(zai)普通(tong)的(de)三透鏡聚光(guang)鏡前面，安置一個環(huan)(huan)形(xing)光(guang)闌(lan)，如(ru)圖(tu)9即可實現雙(shuang)(shuang)向(xiang)(xiang)暗視場照明。在(zai)聚光(guang)鏡的(de)更(geng)后一片(pian)與(yu)載物(wu)玻(bo)璃(li)片(pian)之間(jian)浸以液體(ti)，而蓋玻(bo)璃(li)片(pian)與(yu)物(wu)鏡之間(jian)是干的(de)。于是，經過聚光(guang)鏡的(de)環(huan)(huan)形(xing)光(guang)束(shu)，在(zai)蓋玻(bo)璃(li)片(pian)內(nei)全反射(she)而不能(neng)進(jin)(jin)入(ru)物(wu)鏡，形(xing)成如(ru)圖(tu)中的(de)回路。進(jin)(jin)入(ru)物(wu)鏡的(de)只(zhi)是由標本(ben)上(shang)的(de)微(wei)粒所散射(she)的(de)光(guang)線，形(xing)成了雙(shuang)(shuang)向(xiang)(xiang)暗視場照明。

　　三、 光學顯微(wei)鏡的組成結構

　　光學顯(xian)(xian)微鏡包括光學系統和機械裝置兩大(da)部(bu)分，而(er)數(shu)碼顯(xian)(xian)微鏡還(huan)包括數(shu)碼攝(she)像系統，現分述(shu)如下：

　　（一） 機械(xie)裝(zhuang)置

　　1． 機架 顯微(wei)鏡的主體(ti)部分，包(bao)括底座和彎(wan)臂。

　　2． 目鏡筒

　　位于(yu)機(ji)架(jia)上方，靠圓(yuan)形燕(yan)尾槽與機(ji)架(jia)固定，目(mu)鏡插在其(qi)上。根(gen)據有否攝像(xiang)功能，可分為雙目(mu)鏡筒和(he)三(san)目(mu)鏡筒；根(gen)據瞳距的調節方式(shi)不同，可分為鉸鏈式(shi)和(he)平移式(shi)。

　　3． 物鏡轉換器(qi)

　　它是(shi)一個(ge)旋轉圓盤(pan)，上有3～5個(ge)孔，分別裝有低倍或高倍物鏡(jing)鏡(jing)頭(tou)。轉動物鏡(jing)轉換器就(jiu)可讓(rang)不(bu)同倍率(lv)的物鏡(jing)進入工作光路。

　　4． 載物臺

　　是放(fang)置(zhi)玻片的平臺(tai)，其中央具有(you)(you)通光孔。臺(tai)上有(you)(you)一個彈性的標本夾(jia)，用來(lai)夾(jia)住載玻片。右下方有(you)(you)移動手柄，使載物(wu)臺(tai)面(mian)可在(zai)XY雙方向進行移動。

　　5． 調焦機構

　　利用調焦手輪可以驅動調焦機構，使載物(wu)臺作粗調和微調的(de)升降運動，從而使被觀(guan)察物(wu)體對焦清晰成像。

　　6． 聚光(guang)器(qi)調節(jie)機構 聚光(guang)器(qi)安(an)裝在(zai)其上，調節(jie)螺旋可以使(shi)聚光(guang)器(qi)升降(jiang)，用以調節(jie)光(guang)線的強弱。

　　（二） 光學系統

　　1． 目鏡

　　它是(shi)插在(zai)(zai)(zai)目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)筒頂部的(de)(de)鏡(jing)(jing)頭(tou)，由一(yi)組透鏡(jing)(jing)組成(cheng)，可(ke)(ke)以(yi)使物鏡(jing)(jing)成(cheng)倍地(di)分(fen)辨、放大(da)(da)物像，例如(ru)10X、15X等。按照所能看到的(de)(de)視(shi)場(chang)大(da)(da)小，目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)可(ke)(ke)分(fen)為(wei)(wei)視(shi)場(chang)較(jiao)小的(de)(de)普(pu)通目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)，和視(shi)場(chang)較(jiao)大(da)(da)的(de)(de)大(da)(da)視(shi)場(chang)目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)(或稱廣角目(mu)(mu)鏡(jing)(jing))兩類。較(jiao)**顯微鏡(jing)(jing)的(de)(de)目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)上(shang)還裝有視(shi)度調(diao)節機構，操作者可(ke)(ke)以(yi)方便(bian)快(kuai)捷地(di)對左右(you)眼分(fen)別進(jin)行視(shi)度調(diao)整；此外，在(zai)(zai)(zai)這些目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)上(shang)可(ke)(ke)以(yi)加(jia)裝測(ce)量分(fen)劃板，測(ce)量分(fen)劃板的(de)(de)象總能清晰地(di)調(diao)焦在(zai)(zai)(zai)標本的(de)(de)焦面上(shang)；并且，為(wei)(wei)了防止(zhi)目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)被(bei)取走(zou)以(yi)及減少運輸中被(bei)損壞的(de)(de)可(ke)(ke)能性(xing)，這些目(mu)(mu)鏡(jing)(jing)可(ke)(ke)以(yi)被(bei)鎖定(ding)。

　　2． 物鏡

　　它安裝在(zai)轉換器的孔上，也(ye)是(shi)由一組透鏡組成的，能夠把(ba)物(wu)體(ti)清晰地放大。物(wu)鏡上刻有(you)(you)放大倍(bei)數，主要有(you)(you)10X、40X、60X、100X等。高(gao)倍(bei)物(wu)鏡中(zhong)多采用(yong)浸液(ye)物(wu)鏡，即(ji)在(zai)物(wu)鏡的下表面和標本片的上表面之間(jian)填(tian)充折射(she)率為1.5左右的液(ye)體(ti)（如杉木油），它能顯(xian)著的提高(gao)顯(xian)微觀察的分辨率。

　　3． 光源 有(you)鹵(lu)素燈(deng)、鎢絲燈(deng)、汞燈(deng)、熒光燈(deng)、金(jin)屬鹵(lu)化物(wu)燈(deng)等。

　　4． 聚光器

　　包括聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡、孔徑光(guang)(guang)闌。聚(ju)(ju)光(guang)(guang)鏡由透鏡組(zu)成(cheng)，它可(ke)以(yi)集中(zhong)透射過來的(de)(de)光(guang)(guang)線，使更多的(de)(de)光(guang)(guang)能(neng)集中(zhong)到被觀察(cha)的(de)(de)部位(wei)。孔徑光(guang)(guang)闌可(ke)控制聚(ju)(ju)光(guang)(guang)器的(de)(de)通光(guang)(guang)范圍，用以(yi)調節光(guang)(guang)的(de)(de)強度。

　　（三） 數(shu)碼攝像系(xi)統

　　1． 攝像頭

　　2． 圖像采(cai)集卡(ka)

　　3． 軟件

　　4． 微機

　　四、 光學顯微(wei)鏡(jing)的分類

　　光學顯微鏡有多種分類方法：按使用目鏡的數目可分為雙目和單目顯微鏡；按圖像是否有立體感可分為立體視覺和非立體視覺顯微鏡；按觀察對像可分為生物和金相顯微鏡等；按光學原理可分為偏光、相襯和微差干涉對比顯微鏡等；按光源類型可分為普通光、熒光、紫外光、紅外光和激光顯微鏡等；按接收器類型可分為目視、數碼（攝像）顯微鏡等。常用的顯微鏡有雙目體視顯微鏡、金相顯微(wei)鏡、偏光顯微(wei)鏡、熒光顯微(wei)鏡等。

　　1． 雙目體視顯微鏡

　　雙目體視顯微鏡又(you)稱"實(shi)體顯微(wei)鏡"或"解(jie)剖鏡"，是一種具有正象立體感地目視儀器。在生物(wu)、醫(yi)學領域廣(guang)泛用(yong)于(yu)切片操作和顯微(wei)外科手術；在工業中用(yong)于(yu)微(wei)小(xiao)零件和集成電路的觀測、裝配、檢查等(deng)工作。它具有如下特點：

　　（1） 利(li)用雙通道光(guang)(guang)路(lu)，雙目(mu)鏡(jing)筒中(zhong)的左右兩(liang)光(guang)(guang)束(shu)不是平行，而是具有(you)一(yi)(yi)定的夾角--體(ti)視(shi)角（一(yi)(yi)般(ban)為(wei)12度--15度），為(wei)左右兩(liang)眼提供一(yi)(yi)個具有(you)立體(ti)感的圖(tu)像。它實質上(shang)是兩(liang)個單鏡(jing)筒顯微鏡(jing)并列放置，兩(liang)個鏡(jing)筒的光(guang)(guang)軸構成(cheng)(cheng)相(xiang)當于人們用雙目(mu)觀(guan)察一(yi)(yi)個物體(ti)時所(suo)形(xing)成(cheng)(cheng)的視(shi)角，以此形(xing)成(cheng)(cheng)三維(wei)空間的立體(ti)視(shi)覺圖(tu)像。

　　（2） 象(xiang)是直立的(de)，便于操作(zuo)和解剖(pou)，這是由(you)于在目(mu)鏡下方的(de)棱鏡把象(xiang)倒轉過(guo)來的(de)緣故。

　　（3） 雖然放大率(lv)不如常規(gui)顯微鏡，但其工作距離很長(chang)。

　　（4） 焦深大(da)，便于觀察被檢物體(ti)的全層。

　　（5） 視場直徑大。

　　目(mu)前體(ti)視鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)光(guang)(guang)學結構是：由(you)一個共用的(de)(de)(de)(de)初(chu)級物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)，對物(wu)(wu)體(ti)成(cheng)(cheng)象后的(de)(de)(de)(de)兩光(guang)(guang)束被(bei)兩組(zu)中間(jian)物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)----變焦鏡(jing)(jing)(jing)(jing)分開，并成(cheng)(cheng)一體(ti)視角再(zai)經各自的(de)(de)(de)(de)目(mu)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)成(cheng)(cheng)象，它的(de)(de)(de)(de)倍率變化是由(you)改變中間(jian)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)組(zu)之(zhi)間(jian)的(de)(de)(de)(de)距離而獲得的(de)(de)(de)(de)，因此又稱為"連(lian)續變倍體(ti)視顯(xian)微鏡(jing)(jing)(jing)(jing)"（Zoom-stereo microscope）。隨著應用的(de)(de)(de)(de)要求，目(mu)前體(ti)視鏡(jing)(jing)(jing)(jing)可選配(pei)豐(feng)富的(de)(de)(de)(de)選購附件，如熒光(guang)(guang)，照相，攝象，冷光(guang)(guang)源等等。

　　2． 金相顯(xian)微(wei)鏡

　　金(jin)(jin)相顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)是專門用于(yu)觀察金(jin)(jin)屬和礦物等(deng)不透(tou)(tou)明(ming)物體金(jin)(jin)相組織的(de)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)。這(zhe)些不透(tou)(tou)明(ming)物體無法在普(pu)通的(de)透(tou)(tou)射(she)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)中觀察，故金(jin)(jin)相和普(pu)通顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)主要差別在于(yu)前者以反射(she)光(guang)，而后者以透(tou)(tou)射(she)光(guang)照(zhao)明(ming)。在金(jin)(jin)相顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)中照(zhao)明(ming)光(guang)束(shu)從物鏡(jing)(jing)(jing)方(fang)向(xiang)射(she)到被(bei)觀察物體表面，被(bei)物面反射(she)后再返回物鏡(jing)(jing)(jing)成(cheng)(cheng)像。這(zhe)種反射(she)照(zhao)明(ming)方(fang)式也廣泛用于(yu)集成(cheng)(cheng)電(dian)路硅片的(de)檢測工作。

　　3． 偏(pian)光顯(xian)微鏡(jing)（Polarizing microscope）

　　偏光顯微鏡是(shi)用于研究所謂透(tou)(tou)明與不透(tou)(tou)明各(ge)向(xiang)異性材料的(de)一種顯微鏡。凡具有(you)雙折射(she)的(de)物(wu)(wu)質，在(zai)偏光顯微鏡下就能分辨的(de)清楚(chu)，當然這些物(wu)(wu)質也可(ke)用染色法來進行觀察，但有(you)些則不可(ke)能，而要利(li)用偏光顯微鏡。

　　（1） 偏光顯微鏡的特點(dian)

　　將普通(tong)光改變為偏振光進行鏡(jing)檢的方法，以鑒別某一物質是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異(yi)性）。雙折射性是晶體的基(ji)本特(te)性。因此，偏光顯微(wei)鏡(jing)被廣泛地應用(yong)在礦(kuang)物、化學等領域，在生物學和植(zhi)物學也有應用(yong)。

　　（2） 偏光顯微(wei)鏡的基本原理

　　偏(pian)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)(jing)的原理比(bi)較復雜，在(zai)此不(bu)作過多介紹(shao),偏(pian)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)(jing)要具備(bei)以下附件：起偏(pian)鏡(jing)(jing)，檢(jian)偏(pian)鏡(jing)(jing)，補償器或相位片，專用無應力(li)物(wu)鏡(jing)(jing)，旋轉載物(wu)臺。

　　（3） 偏光(guang)鏡檢術的方式

　　正相(xiang)鏡(jing)檢（Orthscope）:又稱無畸變鏡(jing)檢，其特點是使用(yong)低(di)倍物鏡(jing)，不用(yong)伯特蘭透(tou)鏡(jing)（Bertrand Lens）, 被研究(jiu)對象可(ke)直接用(yong)偏振光(guang)研究(jiu)。同時為使照明孔徑(jing)變小，推開(kai)聚光(guang)鏡(jing)的(de)上(shang)透(tou)鏡(jing)。正相(xiang)鏡(jing)檢用(yong)于檢查物體的(de)雙折射性(xing)。

　　b. 錐光鏡(jing)檢（Conoscope）：又(you)稱干涉(she)鏡(jing)檢，研究在(zai)偏(pian)振光干涉(she)時產生的干涉(she)圖樣(yang)，這種(zhong)方(fang)(fang)法用(yong)于(yu)觀察物體的單軸(zhou)或(huo)雙軸(zhou)性。在(zai)該方(fang)(fang)法中，用(yong)強會聚偏(pian)振光束(shu)照明。

　　（4） 偏光顯微鏡在裝置上的要求

　　a. 光(guang)源(yuan)：更(geng)好采(cai)用單色(se)光(guang)，因為光(guang)的速度，折射率(lv)，和干涉現(xian)象由于波長的不同(tong)而(er)有差異(yi)。一般鏡檢可(ke)使用普通光(guang)。

　　b. 目(mu)鏡：要帶有十字線的目(mu)鏡。

　　c. 聚光(guang)鏡(jing)：為了取(qu)得平(ping)行偏光(guang)，應使用能推出上透(tou)鏡(jing)的(de)搖(yao)出式聚光(guang)鏡(jing)。

　　d. 伯(bo)特蘭透鏡(jing)：聚(ju)光鏡(jing)光路中的輔(fu)助部件(jian)，這是把物體所有造成的初(chu)級相放大為次級相的輔(fu)助透鏡(jing)。它可保證用目鏡(jing)來觀(guan)察(cha)在物鏡(jing)后焦平面(mian)中形成的平涉圖樣(yang)。

　　（5） 偏光鏡檢術的(de)要(yao)求

　　a. 載(zai)物臺(tai)的中心(xin)與光軸同(tong)軸。

　　b. 起(qi)偏鏡和(he)檢偏鏡應處(chu)于(yu)正(zheng)交位置。

　　c. 制片不(bu)宜(yi)過薄。

　　4． 熒(ying)光顯微鏡

　　熒(ying)(ying)(ying)光(guang)顯微鏡(jing)是用短波長(chang)的光(guang)線(xian)照(zhao)射用熒(ying)(ying)(ying)光(guang)素染色過的被檢物(wu)體，使之(zhi)受(shou)激發后(hou)而(er)產(chan)生長(chang)波長(chang)的熒(ying)(ying)(ying)光(guang)，然后(hou)觀察。熒(ying)(ying)(ying)光(guang)顯微鏡(jing)廣泛應用于生物(wu)，醫學等領域。

　　（1） 熒光顯微鏡(jing)一般分為透射(she)和落(luo)射(she)式兩種類型。

　　a. 透(tou)射式：激發(fa)光來自被(bei)檢物體的(de)(de)下(xia)方，聚(ju)光鏡(jing)為暗視(shi)野(ye)聚(ju)光鏡(jing)，使(shi)激發(fa)光不進入物鏡(jing)，而(er)使(shi)熒光進入物鏡(jing)。它在低倍情況下(xia)明亮，而(er)高倍則暗，在油浸和調中時(shi)，較難操作，尤(you)以低倍的(de)(de)照明范圍(wei)難于(yu)確定，但能得到很(hen)暗的(de)(de)視(shi)野(ye)背景。透(tou)射式不使(shi)用(yong)于(yu)非(fei)透(tou)明的(de)(de)被(bei)檢物體。

　　b. 落射(she)式：透射(she)式目前幾(ji)乎被淘汰，新型的熒光(guang)顯微鏡多為落射(she)式，光(guang)源來自被檢物(wu)體的上方(fang)，在(zai)光(guang)路中具有分光(guang)鏡，所以(yi)(yi)對透明和不透明的被檢物(wu)體都適用。由于物(wu)鏡起了聚光(guang)鏡的作(zuo)用，不僅便(bian)于操作(zuo)，而(er)且從(cong)低倍到高倍，可以(yi)(yi)實現整(zheng)個視(shi)場(chang)的均勻(yun)照明。

　　（2） 熒光鏡(jing)檢術的(de)注意(yi)事項

　　a. 激發光(guang)長時間的照射(she)，會(hui)發生熒光(guang)的衰減(jian)和淬(cui)滅現象，因此盡可能縮短觀(guan)察時間，暫時不觀(guan)察時，應用擋板(ban)遮蓋激發光(guang)。

　　b. 作油(you)鏡觀(guan)察(cha)時(shi)，應(ying)用"無(wu)熒光油(you)"。

　　c. 熒(ying)光幾乎(hu)都較弱，應在較暗的室(shi)內進(jin)行。

　　d. 電(dian)源更好(hao)裝穩壓(ya)器，否則電(dian)壓(ya)不穩不僅會降低汞燈的壽命，也(ye)會影響鏡檢的效(xiao)果。

　　目(mu)前(qian)許多(duo)新(xin)興生(sheng)物(wu)研究領域(yu)應用到熒光(guang)顯(xian)微鏡(jing)，如基因原(yuan)位雜交（FISH）等等。

　　5． 相襯顯微鏡（Phase contrast microscope）

　　在光(guang)(guang)學顯微鏡的(de)發(fa)展過程中，相襯鏡檢術的(de)發(fa)明成功，是近代顯微鏡技(ji)術中的(de)重要成就。我(wo)們(men)知道，人眼(yan)只能區分光(guang)(guang)波的(de)波長（顏色(se)）和振(zhen)幅（亮度），對于(yu)無色(se)通明的(de)生物標(biao)本，當光(guang)(guang)線通過時，波長和振(zhen)幅變化不大，在明場觀(guan)察時很難觀(guan)察到(dao)標(biao)本。

　　相襯顯(xian)微(wei)(wei)鏡利(li)(li)用(yong)被檢物體的光程之(zhi)差進行鏡檢，也就(jiu)是有效(xiao)地利(li)(li)用(yong)光的干涉現(xian)象，將人眼不可(ke)分(fen)辨(bian)的相位(wei)差變為可(ke)分(fen)辨(bian)的振幅差，即使是無色透明的物質也可(ke)成為清(qing)晰可(ke)見(jian)。這大大便(bian)利(li)(li)了(le)活體細胞的觀察，因此(ci)相襯鏡檢法廣泛(fan)應(ying)用(yong)于(yu)倒置顯(xian)微(wei)(wei)鏡中。

　　相襯鏡(jing)檢法在裝置上與明場不(bu)同，有(you)一些特殊(shu)要求：

　　a. 環(huan)狀(zhuang)光闌（Ring slit）: 裝在(zai)聚(ju)光鏡(jing)(jing)(jing)的(de)下方，而(er)與聚(ju)光鏡(jing)(jing)(jing)組合為一體---相襯聚(ju)光鏡(jing)(jing)(jing)。它是由大(da)a. 小不(bu)同的(de)環(huan)形光闌裝在(zai)一圓盤內(nei)，外面標有10X、20X、40X、100X等字(zi)樣，與相對應(ying)倍數的(de)物鏡(jing)(jing)(jing)配合使用。

　　b. 相板（Phase plate）: 裝在(zai)物鏡(jing)(jing)的后(hou)焦平面(mian)處，它分(fen)為兩部分(fen)，一是(shi)通過直(zhi)射(she)光的部分(fen)，為半透明的環狀，叫(jiao)共軛面(mian)；另一是(shi)通過衍射(she)光的部分(fen)，?quot；補(bu)償面(mian)"。有相板的物鏡(jing)(jing)稱"相襯物鏡(jing)(jing)"，外殼上常有"Ph"字樣。

　　相襯鏡檢法(fa)是(shi)一種比較復(fu)雜(za)的(de)鏡檢方法(fa)，想(xiang)要(yao)得到好的(de)觀察效果，顯微鏡的(de)調試非常重要(yao)。除此之外還應注意以(yi)下(xia)幾個方面：

　　a. 光源要強，全部開啟孔(kong)徑光闌；

　　b. 使用濾(lv)色片，使光波近于(yu)單色。

　　6． 微(wei)分干涉對比顯微(wei)鏡（Differential interference contrast DIC）

　　微(wei)分干涉(she)對(dui)比鏡(jing)檢術(shu)出現于60年代，它不僅能觀(guan)察無色透明的(de)物體，而且圖象呈現出浮(fu)雕壯的(de)立體感，并(bing)具有相襯鏡(jing)檢術(shu)所不能達到的(de)某些優(you)點，觀(guan)察效(xiao)果(guo)更為逼真。

　　（1） 原理

　　微分干涉(she)對比鏡檢術是利用特制的(de)(de)(de)渥拉斯(si)頓棱鏡來分解光(guang)束(shu)。分裂出(chu)來的(de)(de)(de)光(guang)束(shu)的(de)(de)(de)振動(dong)方向相互垂直且強度相等，光(guang)束(shu)分別(bie)(bie)在距離很近的(de)(de)(de)兩點(dian)上(shang)通過(guo)被檢物體，在相位上(shang)略(lve)有差(cha)別(bie)(bie)。由于兩光(guang)束(shu)的(de)(de)(de)裂距尤(you)小(xiao)，而不出(chu)現重影現象(xiang)，使圖(tu)象(xiang)呈現出(chu)立(li)體的(de)(de)(de)三維感覺(jue)。

　　（2） 微分干涉對比(bi)鏡檢術所需的(de)特殊部件(jian)：

　　a. 起偏鏡

　　b. 檢偏鏡

　　c. 渥(wo)拉斯(si)頓(dun)棱鏡2 塊

　　（3） 微分干(gan)涉對比鏡檢時的注(zhu)意事項

　　a. 因微分干涉靈(ling)敏度高，制片表(biao)面不能有(you)污物和灰塵。

　　b. 具有雙折射(she)性的(de)物質，不能達到微分干涉對比(bi)鏡檢(jian)的(de)效果。

　　c. 倒(dao)置顯微鏡應用微分干(gan)涉時，不能用塑料培養皿(min)。

　　7． 倒置顯微鏡（Inverted microscope）

　　倒置顯微(wei)鏡是為了適(shi)應生物(wu)學、醫學等領域中的組織(zhi)培(pei)養、細胞離體培(pei)養、浮游生物(wu)、環境保護(hu)、食品檢驗等顯微(wei)觀察。

　　由于上述樣品特點的限制，被檢物(wu)體均(jun)放置(zhi)在培養皿（或(huo)培養瓶(ping)）中，這樣就要求倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)的物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)和聚光(guang)(guang)鏡(jing)(jing)(jing)的工作距離很(hen)長，能直接對(dui)培養皿中的被檢物(wu)體進行顯微(wei)觀察和研究。因此，物(wu)鏡(jing)(jing)(jing)、聚光(guang)(guang)鏡(jing)(jing)(jing)和光(guang)(guang)源的位置(zhi)都(dou)顛倒(dao)過來(lai)，故稱為(wei)"倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)"。

　　由于(yu)工作距(ju)離的限制，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)物鏡(jing)(jing)的更大(da)(da)放大(da)(da)率為60X。一般研究用倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)都配(pei)(pei)置(zhi)有4X、10X、20X、及(ji)40X 相差物鏡(jing)(jing)，因為倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)多用于(yu)無色(se)透明的活體觀察(cha)。如果(guo)用戶(hu)有特殊需(xu)要，也可以(yi)選(xuan)配(pei)(pei)其它(ta)附(fu)件，用來(lai)完成(cheng)微分(fen)干涉、熒光及(ji)簡易偏光等觀察(cha)。

　　目見倒置顯(xian)微(wei)鏡廣泛應用于patch-clamp ,transgene ICSI 等領域。

　　8． 數(shu)碼顯微鏡

　　數(shu)(shu)碼顯微鏡是以(yi)攝像(xiang)頭（即電(dian)(dian)(dian)視(shi)攝像(xiang)靶或(huo)電(dian)(dian)(dian)荷耦合器）作(zuo)為接(jie)收元(yuan)件的(de)顯微鏡。在顯微鏡的(de)實(shi)像(xiang)面處裝入攝像(xiang)頭取代人眼作(zuo)為接(jie)收器，通過這(zhe)(zhe)種(zhong)光(guang)電(dian)(dian)(dian)器件把光(guang)學(xue)圖像(xiang)轉換(huan)成(cheng)電(dian)(dian)(dian)信(xin)號的(de)圖像(xiang)，然后對(dui)之進行尺(chi)寸檢測(ce)、顆粒計數(shu)(shu)等工(gong)作(zuo)。這(zhe)(zhe)類顯微鏡可以(yi)與(yu)計算機聯用(yong)，這(zhe)(zhe)便于(yu)實(shi)現檢測(ce)和(he)信(xin)息處理的(de)自動化，多應用(yong)于(yu)需要進行大量繁瑣(suo)檢測(ce)工(gong)作(zuo)的(de)場合。