熒光(guang)顯微鏡(jing)根據襯度形成(cheng)的機(ji)制,對(dui)散射(she)吸收(shou)像(xiang)可以有(you)兩種成(cheng)像(xiang)方式(shi):
明(ming)場(chang)成像法:選(xuan)用單一透射(she)束形(xing)成的衍(yan)射(she)襯(chen)度像,亮背景上的暗圖形(xing)像,像清晰。物鏡光闌的孔越小(xiao),明(ming)場(chang)像的襯(chen)度越大。
暗(an)(an)場(chang)成像(xiang)(xiang)法:選用(yong)單一衍射束形(xing)成的衍射襯(chen)度像(xiang)(xiang),暗(an)(an)背景上(shang)的亮圖(tu)形(xing)像(xiang)(xiang),像(xiang)(xiang)有畸變。這種(zhong)暗(an)(an)場(chang)成像(xiang)(xiang)法可以提高圖(tu)像(xiang)(xiang)的襯(chen)度。
熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)濾(lv)色片的選用:
濾(lv)(lv)色片(pian)是熒(ying)(ying)光(guang)顯(xian)微鏡的(de)(de)關鍵部件, 在熒(ying)(ying)光(guang)顯(xian)微鏡中按其(qi)功能可分為激(ji)發(fa)濾(lv)(lv)色片(pian)和(he)截(jie)止(zhi)濾(lv)(lv)色片(pian)兩類。激(ji)發(fa)濾(lv)(lv)色片(pian)的(de)(de)功能是從光(guang)源中分析出所(suo)需(xu)的(de)(de)特定(ding)光(guang)譜, 以(yi)激(ji)發(fa)標本(ben)產生熒(ying)(ying)光(guang)。截(jie)止(zhi)濾(lv)(lv)色片(pian)的(de)(de)功能是僅把標本(ben)上(shang)發(fa)出的(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)透過成(cheng)像(xiang), 而將其(qi)它光(guang)阻擋不(bu)參與成(cheng)像(xiang), 一般激(ji)發(fa)濾(lv)(lv)色片(pian)安置(zhi)在緊靠光(guang)源, 而截(jie)止(zhi)濾(lv)(lv)色片(pian)在物(wu)鏡與目鏡之間。
目前(qian)使用較多的(de)濾(lv)色(se)片(pian)(pian)是色(se)玻(bo)璃和干(gan)涉濾(lv)色(se)片(pian)(pian), 色(se)玻(bo)璃大都屬寬波帶濾色(se)片, 透過波段寬, 透過(guo)率(lv)隨厚(hou)度(du)而降低, 價格(ge)相對低(di)廉。由于色玻璃(li)與空氣的(de)界面上, 約有4%光線被反射(she)掉, 玻片愈多, 光能損(sun)失愈大, 限制了(le)它的使用性能。干涉濾色片的出現, 可按(an)需要(yao)制成能透過或截止一定波段的濾色(se)片(pian), 從而(er)促使(shi)熒光(guang)顯微(wei)術的進展, 現代(dai)技術上已能對某波段的透射(she)率(lv)(lv)或反(fan)射(she)率(lv)(lv)進行控制。
熒光顯微鏡根據結構(gou)組成(cheng)部分可以分成(cheng)兩種不同類型的熒光顯微(wei)鏡:
透射式(shi)熒(ying)光顯微(wei)鏡(jing)(jing),它和普通光學顯微(wei)鏡(jing)(jing)類似,光源是從(cong)鏡(jing)(jing)座出(chu)發經過聚光鏡(jing)(jing)到達樣品激發熒(ying)光后通過物鏡(jing)(jing),到達目鏡(jing)(jing)。
落射式熒(ying)光顯微(wei)鏡(jing),也是常見的熒光顯微鏡,它的光源是通過物鏡落到樣品上,激發熒光以后再發射回物鏡,到達目鏡。
透射式熒光顯微鏡和落射式熒(ying)光顯微鏡,它們的光源都要經過激發濾色鏡過,濾掉一部分的可見光,但是它們的光源來源相反,透射式熒光顯微鏡光源來源于下方,而落射式熒光顯微鏡則是上方,具有分光鏡的功能,可以觀察透明和不透明的被檢物體,突破透射式熒光顯微鏡的局限性,因此隨著技術不斷進步,落射式熒光顯微鏡逐漸替代落射式熒光顯微鏡。