體視熒光顯(xian)微鏡(jing)的使用方法(fa)：

(1)將材(cai)料(liao)片放在載物臺上。

(2)開啟體視熒光顯微鏡穩壓器，然后按下啟動組點燃紫外燈15min內不得關閉，關閉后3min內不得再啟動。

(3)將激發濾光(guang)片(pian)轉至v，分色片(pian)調(diao)到v，選用495或(huo)475nm阻擋濾光(guang)片(pian)。

(4)選(xuan)用uvFL40、uvFL100熒光(guang)接物鏡(jing)鏡(jing)檢。

(5)在玻片(pian)上加無(wu)熒光油，先用(yong)40 x，再用(yong)100 x調焦鏡檢.呈現熒光。

(6)因(yin)熒光(guang)物質受紫外光(guang)照射時隨時間的增長熒光(guang)逐漸(jian)變弱，因(yin)此(ci)鏡(jing)檢(jian)時應經常變換視野(ye)。

(7)也可用(yong)uvFL10或uvFL20低(di)倍鏡鏡檢材(cai)料(用(yong)低(di)倍鏡時不加無熒光油)。

熒光圖像的記(ji)錄方(fang)法：

體視熒光顯微(wei)鏡所看到的熒光圖像，一(yi)是(shi)具有形態學特征，二是(shi)具有熒光的顏色和(he)亮度，在判斷結(jie)(jie)(jie)果時，要將二者(zhe)結(jie)(jie)(jie)合(he)起來綜合(he)判斷。結(jie)(jie)(jie)果記錄根(gen)據主(zhu)觀(guan)(guan)指(zhi)標(biao)，即憑(ping)工作者(zhe)目力觀(guan)(guan)察。作為一(yi)般定性(xing)觀(guan)(guan)察，基本上可(ke)靠的。隨著技術科學的發展(zhan)，在不同程度上采用客觀(guan)(guan)指(zhi)標(biao)記錄判斷結(jie)(jie)(jie)果，如用細胞分(fen)光光度計，圖像分(fen)析儀(yi)等儀(yi)器。但這些儀(yi)器記錄的結(jie)(jie)(jie)果，也要結(jie)(jie)(jie)合(he)主(zhu)觀(guan)(guan)的判斷。

體視熒光顯微鏡攝(she)(she)影技術對(dui)于記(ji)錄(lu)熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)圖像(xiang)十分必要，由于熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)很易褪(tun)色減弱，要即(ji)時攝(she)(she)影記(ji)錄(lu)結果。方法與普(pu)通顯(xian)微(wei)攝(she)(she)影技術基本相同。只是需(xu)要采用高速感光(guang)(guang)(guang)膠(jiao)片如ASA200以上(shang)(shang)或24。以上(shang)(shang)。因紫外(wai)光(guang)(guang)(guang)對(dui)熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)猝滅作用大，如FITC的標記(ji)物，在紫外(wai)光(guang)(guang)(guang)下照射30s，熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)亮度(du)降(jiang)低50%。所以，曝光(guang)(guang)(guang)速度(du)太慢(man)，就不能將熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)圖像(xiang)拍攝(she)(she)下來。一(yi)般研究型體視熒(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)顯(xian)微(wei)鏡都有半自(zi)動或全自(zi)動顯(xian)微(wei)攝(she)(she)影系統裝置。

注意事項：

(1)嚴格按照體(ti)視熒光(guang)顯(xian)微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。

(2)應(ying)(ying)在暗室中進(jin)行(xing)檢查(cha)。進(jin)入暗室后，接上電源(yuan)，點燃超(chao)高壓汞燈(deng)5～15min，待光源(yuan)發(fa)出強光穩定后，眼睛完全適應(ying)(ying)暗室，再開始(shi)觀察標(biao)本。

(3)防(fang)(fang)止紫(zi)外線對眼(yan)睛的損(sun)害，在(zai)調整光源(yuan)時應戴上(shang)防(fang)(fang)護(hu)眼(yan)鏡。

(4)檢查時間(jian)每次以(yi)1～2h為宜，超過(guo)90min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減(jian)弱(ruo);標本受紫外線照射(she)3～5min后，熒光也明顯(xian)減(jian)弱(ruo);所(suo)以(yi)，不得超過(guo)2～3h。

(5)體視熒(ying)光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。應避免每天數次點燃光源。

(6)標(biao)本染(ran)色后立即觀察，因時(shi)間(jian)久了熒光會逐漸減弱(ruo)。若將標(biao)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱(ruo)時(shi)間(jian)，防止封裱(biao)劑蒸發。

(7)熒(ying)光(guang)亮度的(de)判(pan)斷(duan)標準：一般分為四級，即“一”—無或可(ke)見微弱熒(ying)光(guang)。“+”—僅能(neng)見明確可(ke)見的(de)熒(ying)光(guang)。“++”—可(ke)見有明亮