我們先來簡單了解一下熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的工作原理。

熒光顯微鏡：熒光顯微鏡是以紫外線為光源，樣品自身發光或者經過熒光染料或熒光抗體染色處理之后，照射被檢物體，受紫外激發產生熒光，探測器檢測，在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。

激光共聚焦顯微鏡：全稱是激光掃描共聚焦熒光顯微鏡，是一種利用計算機、激光和圖像處理技術獲得生物樣品三維數據，以激光作為光源，逐點激發樣品內熒光，采用精密針孔濾波技術，有效抑制了非聚焦平面的雜散光，具有層析成像能力和很高的成像信噪比。在熒光顯微鏡的基礎上添加了激光掃描裝置，激光從發射器發出，在照明針孔分成三束，經過分光鏡反射，在物鏡處折射，聚焦于樣品的焦平面上，如果樣品中有被激光激發的熒光基團，就會產生熒光，按照激光進入的光路原路返回，返回的熒光在成像系統（一種可以把光信號轉化為電信號傳感器）中再次聚焦成相。因為在兩個位置（樣品和成像系統）聚焦，所以叫做共聚焦。

熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區別。

熒光顯微鏡又叫寬場熒光顯微鏡，當成像面較厚，焦面上方下方的干擾信號都會被觀察到，影響實驗結果，因此熒光顯微鏡只能觀察靜態的亞細胞結構。

激光共聚焦顯微鏡是在傳統熒光顯微鏡成像的基礎上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計算機控制來進行數字化圖像采集和處理的系統。可以觀察亞細胞層次的一些生化變化，是目前先進的分子細胞生物學的分析儀器。

激光共聚焦顯微鏡比普通熒光顯微鏡獲得更高對比度、高分辨率圖像，同時具有高靈敏度，對檢測樣品無損傷、可靠和優良重復性。激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實現多重熒光的同時可觀察并可形成清晰的三維圖像等優點，能比寬場看到的成像面更薄，更清晰，在較以往更短的采集時間內輕松實現超高分辨率更大觀察視野成像。