熒光顯微鏡是(shi)用(yong)短波長的(de)光(guang)線照射(she)用(yong)熒光(guang)素染色過的(de)被(bei)檢物體(ti),使之受激發后而(er)產生長波長的(de)熒光(guang),然后觀察。熒光(guang)顯微鏡廣泛應用(yong)于生物,醫學等(deng)領域等(deng)。
⑴熒光(guang)顯微鏡—般分為透(tou)射和落(luo)射式兩種類(lei)型(xing)。
a.透射式激發(fa)光來(lai)自被檢物(wu)(wu)體(ti)的(de)下(xia)方(fang),聚(ju)光鏡為暗(an)視野聚(ju)光鏡,使發(fa)光不(bu)進入物(wu)(wu)鏡,而使熒光進入物(wu)(wu)鏡。它在低倍情況下(xia)明(ming)亮(liang),而高怕僅暗(an),在注漫(man)和(he)淘中時,較誰(shui)操作,尤以低倍的(de)照明(ming)被圍準(zhun)于(yu)確定,但能(neng)得到很暗(an)的(de)視野背景。透射式不(bu)使用于(yu)非透明(ming)的(de)被檢物(wu)(wu)體(ti)。
b.落射式(shi)目前幾乎被淘汰,新(xin)型的(de)熒光(guang)顯微統多(duo)為落射式(shi),光(guang)源來自被檢動(dong)依(yi)的(de)上(shang)方,在光(guang)路中具有分光(guang)鏡(jing),所(suo)以對透(tou)明和不(bu)適(shi)明的(de)被檢物休體都(dou)適(shi)用。由于物確(que)起(qi)了聚光(guang)接的(de)作(zuo)(zuo)用,不(bu)僅(jin)便于操(cao)作(zuo)(zuo),而且從(cong)低(di)倍到高倍,可以實現整個視場的(de)均勻(yun)照(zhao)明。
(2)熒(ying)光鏡檢術的注(zhu)意事項
a.激發光長(chang)時(shi)(shi)間的照射(she),會發生光的衰減(jian)和(he)淬滅現象,因此盡可(ke)能(neng)縮(suo)短觀(guan)察時(shi)(shi)間,暫時(shi)(shi)不(bu)觀(guan)察時(shi)(shi),應(ying)用擋板遮(zhe)蓋發光。
b.作(zuo)油鏡觀察(cha)時,應用(yong)無熒光鏡油"。
c.做熒光實驗,普遍熒光比較弱,應在較暗的室內進行。電源可裝穩壓器,否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命,也會影響效果,目前新研究領域都會用到熒光顯微鏡,如基因原位雜交FISH)等。
熒光拍攝通(tong)(tong)常需要(yao)(yao)使(shi)用制(zhi)冷型(xing)CCD(成像(xiang)(xiang)系(xi)統(tong)相(xiang)(xiang)機),因為制(zhi)冷CCD可(ke)以減(jian)少背景噪聲,對(dui)弱熒光信號采(cai)集很(hen)有好(hao)處,特別是像(xiang)(xiang)單分子成像(xiang)(xiang)。采(cai)集強光信號不(bu)一定要(yao)(yao)用制(zhi)冷CCD,可(ke)使(shi)用黑(hei)白相(xiang)(xiang)機,彩(cai)色相(xiang)(xiang)機不(bu)適合熒光采(cai)集,因為其感光度低、分辨(bian)率(lv)也(ye)低,除(chu)非(fei)熒光信號很(hen)高,對(dui)分辯率(lv)要(yao)(yao)求不(bu)高或者(zhe)使(shi)用雙通(tong)(tong)道濾色片時才適合用彩(cai)色相(xiang)(xiang)機。