熒光顯微鏡根據(ju)襯度形(xing)成(cheng)的(de)機(ji)制,對散射吸收(shou)像(xiang)可以有兩種成(cheng)像(xiang)方式:
明場成像(xiang)法(fa)(BFI):選(xuan)用(yong)單一透射(she)束(shu)形(xing)成的衍射(she)襯(chen)度像(xiang),亮背(bei)景(jing)上(shang)的暗(an)圖(tu)形(xing)像(xiang),像(xiang)清晰。物鏡光(guang)闌的孔(kong)越小(xiao),明場像(xiang)的襯(chen)度越大。
暗場成(cheng)像法(DFI):選用單一衍射束形成(cheng)的(de)衍射襯度(du)像,暗背景(jing)上的(de)亮(liang)圖(tu)形像,像有(you)畸變。這種暗場成(cheng)像法可(ke)以提高(gao)圖(tu)像的(de)襯度(du)。
熒光(guang)顯微鏡濾色片的選用:
濾色片是熒光顯微鏡的關鍵部件, 在熒光顯微鏡中按其功能可分為激發濾色片和截止濾色片兩類。激發濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜, 以激發標本產生熒光。截止濾色片的功能是僅把標本上發出的熒光透過成像, 而將其它光阻擋不參與成像, 一般激發濾色片安置在緊靠光源, 而截止濾色片在物鏡與目鏡之間。
目前使用較多(duo)(duo)的(de)濾(lv)(lv)色片(pian)(pian)(pian)是色玻(bo)(bo)璃和干涉濾(lv)(lv)色片(pian)(pian)(pian), 色玻(bo)(bo)璃大(da)都屬(shu)寬波帶濾(lv)(lv)色片(pian)(pian)(pian), 透過波段寬, 透過率隨(sui)厚度而(er)降低, 價(jia)格相對低廉。由于色玻(bo)(bo)璃與空氣的(de)界面上(shang), 約有4% 光(guang)線被反射(she)掉, 玻(bo)(bo)片(pian)(pian)(pian)愈(yu)多(duo)(duo), 光(guang)能損失愈(yu)大(da), 限(xian)制(zhi)了它的(de)使用性能。干涉濾(lv)(lv)色片(pian)(pian)(pian)的(de)出現, 可按需要(yao)制(zhi)成能透過或截(jie)止一(yi)定波段的(de)濾(lv)(lv)色片(pian)(pian)(pian), 從而(er)促使熒光(guang)顯微術的(de)進展, 現代技術上(shang)已能對某波段的(de)透射(she)率或反射(she)率進行控制(zhi)。
熒(ying)光顯微(wei)鏡根據結(jie)構組(zu)成部分可以分成兩(liang)種(zhong)不同類型的熒(ying)光顯微(wei)鏡:
透射(she)式熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing),它和普通光(guang)學顯微鏡(jing)類似(si),光(guang)源是從(cong)鏡(jing)座(zuo)出發經過(guo)聚光(guang)鏡(jing)到達(da)樣品(pin)激發熒(ying)光(guang)后(hou)通過(guo)物鏡(jing),*后(hou)到達(da)目鏡(jing)。
落射式熒光顯微鏡,也是*常見的熒(ying)光顯微鏡,它的光源是通過物鏡落到樣品上,激發熒光以后再發射回物鏡,*后到達目鏡。
透射式熒光顯微鏡和落射式熒光顯微鏡,它們的光源都要經過激發濾色鏡過,濾掉一部分的可見光,但是它們的光源來源相反,透射式熒光顯微鏡光源來源于下方,而落射式熒光顯微鏡則是上方,具有分光鏡的功能,可以觀察透明和不透明的被檢物體,突破透射式熒光顯微(wei)鏡的局限性,因此隨著技術不斷進步,落射式熒光顯微鏡逐漸替代落射式熒光顯微鏡。