熒(ying)光顯微鏡是利用一個高發光效率的點光源，經過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發光、激發標本內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高，主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構造是由普通光學顯微鏡加上一些附件(如熒光光源 、激發濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎上組成的。

熒光光源—般(ban)采用超高壓汞(gong)燈(deng)(50一200W)，它可發(fa)出各種波長(chang)的(de)光(guang)，但每種熒(ying)光(guang)物質都有一個產生*強熒(ying)光(guang)的(de)激(ji)(ji)發(fa)光(guang)波長(chang) ，所(suo)以需加(jia)用激(ji)(ji)發(fa)濾片(一(yi)般有紫外(wai)、紫色、藍色和(he)綠(lv)色激發濾片)，僅使一定波長的激(ji)發(fa)光(guang)(guang)透(tou)過(guo)照射到(dao)標本上，而(er)將(jiang)其(qi)他光(guang)(guang)都(dou)吸收(shou)掉。每種(zhong)物質被激(ji)發(fa)光(guang)(guang)照射后，在極短時間內(nei)發(fa)射出較照射波長更長的可見熒光(guang)(guang)。熒光(guang)(guang)具有專一性(xing)，一般都(dou)比(bi)激(ji)發(fa)光(guang)(guang)弱，為能觀察到(dao)專一的熒光(guang)(guang)，在物鏡后面(mian)需(xu)加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有二：一是吸收和阻擋激發光進入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛，二是選擇并讓特異的熒光透過，表現出專一的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。熒(ying)光顯微(wei)鏡(jing)就其光路來分有兩種：

1.透射(she)式熒(ying)光顯微鏡:

激發光(guang)(guang)(guang)源是(shi)通(tong)過(guo)(guo)聚(ju)光(guang)(guang)(guang)鏡穿過(guo)(guo)標本材料(liao)來激發熒(ying)光(guang)(guang)(guang)的(de)。常用暗視野集光(guang)(guang)(guang)器，也(ye)可(ke)用普通(tong)集光(guang)(guang)(guang)器，調節反光(guang)(guang)(guang)鏡使(shi)激發光(guang)(guang)(guang)轉射(she)和(he)旁(pang)射(she)到標本上.這是(shi)比較(jiao)舊式的(de)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)顯微鏡。其優點是(shi)低(di)倍(bei)鏡時熒(ying)光(guang)(guang)(guang)強，而缺(que)點是(shi)隨(sui)放大倍(bei)數增加(jia)其熒(ying)光(guang)(guang)(guang)減弱.所(suo)以對觀察較(jiao)大的(de)標本材料(liao)較(jiao)好。

2.落射式熒光(guang)顯微(wei)鏡：

這是近代發(fa)(fa)(fa)(fa)展起(qi)來的(de)(de)新式熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)，與(yu)上(shang)不同(tong)處是激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)從物(wu)鏡(jing)向下落射(she)到(dao)標本表面，即用同(tong)一(yi)物(wu)鏡(jing)作(zuo)為照明(ming)聚(ju)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)器和收集(ji)熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)的(de)(de)物(wu)鏡(jing)。光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)路中需加(jia)上(shang)一(yi)個雙(shuang)(shuang)色束分(fen)(fen)離器，它與(yu)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)鈾呈45。角，激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)被反(fan)(fan)(fan)射(she)到(dao)物(wu)鏡(jing)中，并聚(ju)集(ji)在(zai)樣(yang)品上(shang)，樣(yang)品所(suo)產生的(de)(de)熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)以及由物(wu)鏡(jing)透鏡(jing)表面、蓋玻片(pian)表面反(fan)(fan)(fan)射(she)的(de)(de)激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)同(tong)時(shi)進入物(wu)鏡(jing)，反(fan)(fan)(fan)回到(dao)雙(shuang)(shuang)色束分(fen)(fen)離器，使激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)和熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)分(fen)(fen)開，殘(can)余激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)再(zai)被阻斷濾片(pian)吸收。如換用不同(tong)的(de)(de)激(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)濾片(pian)/雙(shuang)(shuang)色束分(fen)(fen)離器/阻斷濾片(pian)的(de)(de)組合插塊，可滿足不同(tong)熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)反(fan)(fan)(fan)應產物(wu)的(de)(de)需要。此(ci)種熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)的(de)(de)優(you)點是視(shi)野(ye)照明(ming)均勻，成像清晰(xi)，放大倍數愈(yu)大熒光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)愈(yu)強。

(二)熒(ying)光顯微鏡使用方法

1.打(da)開燈源，超高壓汞燈要預熱幾分(fen)鐘才能達到*亮(liang)點。

2.透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發濾片，在物鏡的后面裝上相應的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的插塊。

3.用低倍鏡觀察(cha)，根據(ju)不同型號熒光(guang)顯微鏡的調節裝(zhuang)置，調整光(guang)源中心(xin)，使其位于整個(ge)照(zhao)明光(guang)斑的中央。

4.放置標(biao)本片，調焦后(hou)即(ji)可觀察。 使用(yong)(yong)中(zhong)應注意：末(mo)裝濾光片不(bu)(bu)要用(yong)(yong)眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用(yong)(yong)油鏡觀察標(biao)本時，必(bi)須用(yong)(yong)無熒光的特殊油鏡;高壓汞燈關(guan)閉后(hou)不(bu)(bu)能(neng)立(li)即(ji)重新打開，需(xu)經5分鐘后(hou)才能(neng)再啟動，否(fou)則會不(bu)(bu)穩定，影(ying)響汞燈壽命。

(三)觀察在示教臺上的熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，可見經0.01%的丫啶橙熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發產生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。