透射式熒光顯微鏡:
透射式熒光(guang)顯微鏡由汞燈發出的各種譜線的光線,經激發濾光片后只讓某一種波長的紫外光線通過,如波長為404.7nm藍紫光(guang),經反光(guang)鏡(jing)后(hou),激發(fa)樣品產(chan)生熒光(guang)。這個濾光(guang)片(pian)將其它波(bo)長的光(guang)線濾掉,并使(shi)樣品激發(fa)熒光(guang),所以稱(cheng)激發(fa)濾光(guang)片(pian)。
通常,熒光波長比激發(fa)樣品的(de)(de)光的(de)(de)波長大得(de)多,是可(ke)見(jian)光。這(zhe)樣產生的(de)(de)熒光和透(tou)過樣品的(de)(de)一部(bu)分(fen)激發(fa)光(紫外光),經物鏡成像后,人眼即可用目鏡觀察熒光圖(tu)像。為了防止紫外光進人目鏡視場,降低圖(tu)像材度和(he)損傷人眼,安放了一塊截止濾光片,它(ta)只讓某一部分波長的譜(pu)線通過(guo),如只讓500~750nm的可見光(guang)通過,而(er)不(bu)讓500nm以(yi)下的光通(tong)過,所(suo)以(yi)稱為截止濾(lv)光片。
反射式熒光顯微鏡:
反射式熒光顯微鏡和透射式熒(ying)光顯微鏡的原理類同。
反射式(shi)熒光(guang)顯微鏡有(you)下列優(you)點:
①光(guang)(guang)(guang)能的(de)(de)利用率高(gao)。在(zai)反射(she)式熒光(guang)(guang)(guang)顯微鏡中,激發光(guang)(guang)(guang)直接照射(she)在(zai)標(biao)本的(de)(de)觀察(cha)(cha)表(biao)面;而在(zai)透射(she)式熒光(guang)(guang)(guang)顯微鏡中,激發光(guang)(guang)(guang)穿過具(ju)有一定厚度的(de)(de)標(biao)本后才抵達觀察(cha)(cha)表(biao)面,能量被衰(shuai)減(jian)。
②反射式熒光顯微鏡可以觀察不透明標本。所以現在大多采用反射式熒(ying)光顯微鏡。然而,實現反射熒光的技術難度較高,此技術隨著電子計算機的出現,薄膜技術的不斷發展才得以實現。實際反射式熒光顯微鏡中,激發、截止濾光片和半透分光鏡是做成一個濾光片組。