熒(ying)光顯微(wei)鏡比(bi)普通顯(xian)微鏡復雜，使用(yong)也比(bi)較麻煩，但(dan)只要注(zhu)意下面(mian)幾點，用(yong)戶(hu)自(zi)行(xing)作些校準還是(shi)很容易的。
1、汞燈的校準
基于(yu)熒光(guang)顯微鏡的原理，決定了選用汞(gong)(gong)燈作為其光(guang)源。由(you)于(yu)標本產(chan)生的熒光(guang)比較弱，為了得到較亮的圖像，汞(gong)(gong)燈的校(xiao)準至關重要(yao)。具體校(xiao)準步驟(zou)如(ru)下：
①開啟汞燈后，在熒(ying)光顯微鏡工作臺上放一張白紙，并從物鏡轉換器中轉出物鏡，即轉換器上出現的空孔位于光軸上，卸去轉換器上保護蓋(如無空孔，可卸掉一個低倍物鏡，校準完畢后再旋上)。轉動熒光顯微鏡主體內的濾光片座，選一個透過綠光的濾光片組，使反射照明有光通過物鏡轉換器孔，此時在白紙上可以看到汞燈照亮的光斑。如光斑太亮，可以插入中性濾光片，或帶上太陽眼鏡，以保護眼睛。
②轉(zhuan)動(dong)聚(ju)光(guang)鏡(jing)調(diao)焦(jiao)旋手(shou)，使汞(gong)燈光(guang)弧在白(bai)紙(zhi)上成像清(qing)晰。因汞(gong)燈室(shi)內裝有一個球面反光(guang)鏡(jing)，用來(lai)增加亮(liang)度，于(yu)是(shi)在白(bai)紙(zhi)上看(kan)到兩(liang)個光(guang)弧的像。旋轉(zhuan)汞(gong)燈調(diao)節(jie)旋手(shou)和反光(guang)鏡(jing)位(wei)置(zhi)調(diao)節(jie)旋手(shou)，使兩(liang)個光(guang)弧并立。再轉(zhuan)動(dong)反光(guang)鏡(jing)聚(ju)焦(jiao)調(diao)節(jie)旋手(shou)，使兩(liang)個光(guang)弧有接近相(xiang)等的亮(liang)度。
③旋(xuan)轉汞(gong)燈(deng)調節(jie)旋(xuan)手(shou)和反光(guang)鏡(jing)(jing)(jing)位置調節(jie)旋(xuan)手(shou)，使兩個光(guang)弧重合。再調節(jie)聚光(guang)鏡(jing)(jing)(jing)調焦(jiao)(jiao)旋(xuan)手(shou)，得到放大和均勻的光(guang)弧像。這樣汞(gong)燈(deng)校準工作就(jiu)完成(cheng)了(le)。轉入物鏡(jing)(jing)(jing)后，根據物鏡(jing)(jing)(jing)具體倍率，稍微調節(jie)一下聚光(guang)鏡(jing)(jing)(jing)調焦(jiao)(jiao)旋(xuan)手(shou)就(jiu)可以(yi)了(le)。
2、孔(kong)徑光(guang)(guang)闌(lan)和視場光(guang)(guang)闌(lan)的校準
一般熒光顯微鏡均采用柯勒照明。所謂柯勒照明是一種能夠得到圖像Z大對比和Z大分辨的折中方法。這時，燈絲成像在孔徑光闌上，一般也成像在物鏡Z后一片鏡框上。孔徑光闌是限制光源大小的光闌，而視場光闌是限制人眼在目鏡里看到視野大小的光闌。只有在正確校準柯勒照明的條件下，熒光(guang)顯微鏡(jing)才能獲得它的Z佳光學性能。
柯勒照明(ming)校準(zhun)方法如(ru)下：
①調焦：把樣品(pin)放在工(gong)作臺上，沿(yan)光軸方(fang)向移動工(gong)作臺或物(wu)鏡，對樣品(pin)進行調焦，使成(cheng)像(xiang)清晰。
③關小視(shi)(shi)場(chang)(chang)光(guang)闌(lan)(lan)，于是在視(shi)(shi)場(chang)(chang)里可以看到視(shi)(shi)場(chang)(chang)光(guang)闌(lan)(lan)的影子，即周(zhou)圍一圈變暗(an)，只有中(zhong)間是亮的。調(diao)節聚光(guang)鏡(jing)上(shang)下(xia)位置，使(shi)視(shi)(shi)場(chang)(chang)光(guang)闌(lan)(lan)邊緣清(qing)晰。調(diao)節聚光(guang)鏡(jing)上(shang)調(diao)中(zhong)螺(luo)絲，使(shi)視(shi)(shi)場(chang)(chang)光(guang)闌(lan)(lan)居(ju)中(zhong)。然后再調(diao)大視(shi)(shi)場(chang)(chang)光(guang)闌(lan)(lan)，使(shi)它(ta)略大于目鏡(jing)視(shi)(shi)場(chang)(chang)。
④減小孔徑(jing)光(guang)闌，一(yi)直到視場里看到Z好的像為(wei)止，一(yi)般(ban)孔徑(jing)光(guang)闌為(wei)其Z大時的70%。
