我們先(xian)要知道熒光顯(xian)微鏡的(de)構造即主要包括哪(na)些核心“配件(jian)”。

熒(ying)光(guang)顯微鏡主要包含或(huo)者說(shuo)可以(yi)簡化(hua)為熒光(guang)光(guang)源（激(ji)(ji)光(guang)、LED、汞燈、白激(ji)(ji)光(guang)超(chao)連續譜光(guang)源等）、熒光(guang)濾色塊（不同Chanel通道(dao)）、熒光(guang)成(cheng)像所需的相機、以(yi)及顯微鏡主體（物鏡）幾個部分。

具體(ti)過(guo)(guo)程為，當單色或(huo)寬光(guang)(guang)(guang)譜的(de)光(guang)(guang)(guang)（白激(ji)光(guang)(guang)(guang)、LED、汞燈等）經過(guo)(guo)前方的(de)filter選出不同(tong)的(de)通道，再(zai)經過(guo)(guo)二向分色鏡（短波長(chang)反(fan)射，長(chang)波長(chang)通過(guo)(guo)）到物鏡*后(hou)到達(da)樣(yang)品，由于(yu)熒光(guang)(guang)(guang)樣(yang)品都(dou)是常見(jian)的(de)下轉換的(de)熒光(guang)(guang)(guang)材料如DAPI、GFP、RFP等，即短波長(chang)激(ji)發長(chang)波長(chang)。后(hou)面(mian)激(ji)發出的(de)熒光(guang)(guang)(guang)再(zai)次(ci)經過(guo)(guo)二向色鏡（短反(fan)長(chang)通）以及另一片(pian)filter（將雜光(guang)(guang)(guang)濾掉(diao)）到達(da)成像系(xi)統即相(xiang)機(ji)或(huo)眼睛(jing)。

然后，了解了熒光顯(xian)微鏡(jing)的光路的特點的基礎，我們就可以分析為什么熒光顯微鏡需要校正。

熒(ying)光(guang)成(cheng)像是一個(ge)復雜的(de)(de)(de)(de)系統，除了(le)需要(yao)以上(shang)一些核心(xin)配件(jian)的(de)(de)(de)(de)聯動(dong)和配合(he)外，為(wei)了(le)拍出(chu)更好的(de)(de)(de)(de)效果(guo)，光(guang)路(lu)中不(bu)(bu)可避免的(de)(de)(de)(de)要(yao)加入不(bu)(bu)同的(de)(de)(de)(de)透(tou)鏡(jing)、針孔等等，甚(shen)至是不(bu)(bu)同物(wu)鏡(jing)的(de)(de)(de)(de)取舍。但是這些不(bu)(bu)同配件(jian)件(jian)的(de)(de)(de)(de)聯動(dong)隨(sui)著時間的(de)(de)(de)(de)拉(la)長不(bu)(bu)可能(neng)總是那么好，光(guang)源的(de)(de)(de)(de)功(gong)率、物(wu)鏡(jing)完(wan)好程度、或者(zhe)光(guang)路(lu)中元器件(jian)位(wei)置的(de)(de)(de)(de)輕微改變，抑或載物(wu)臺(tai)的(de)(de)(de)(de)略(lve)微不(bu)(bu)平都會(hui)*終反應(ying)到成(cheng)像效果(guo)上(shang)，所以理論(lun)上(shang)應(ying)該定期評(ping)估顯微鏡(jing)的(de)(de)(de)(de)成(cheng)像質(zhi)量進行校正，尤其是對強度有要(yao)求的(de)(de)(de)(de)實(shi)驗更該如(ru)此。

而且據(ju)我了解，當下國內的(de)(de)一(yi)些平(ping)臺也在做類似的(de)(de)工作，不(bu)過大家用的(de)(de)*普遍(bian)的(de)(de)是熒光beads（熒光微球）來進行(xing)測試評估。