一般熒光顯微鏡均采用柯勒(le)(le)照明(ming)。所謂柯勒(le)(le)照明(ming)是(shi)一(yi)種能夠得(de)到圖像Z大(da)(da)對比和Z大(da)(da)分(fen)辨的(de)(de)折(zhe)中方法。這時，燈絲成(cheng)像在(zai)孔(kong)徑光(guang)闌上，一(yi)般也成(cheng)像在(zai)物鏡(jing)Z后一(yi)片鏡(jing)框上。孔(kong)徑光(guang)闌是(shi)限制光(guang)源大(da)(da)小(xiao)的(de)(de)光(guang)闌，而視場光(guang)闌是(shi)限制人(ren)眼(yan)在(zai)目鏡(jing)里看到視野大(da)(da)小(xiao)的(de)(de)光(guang)闌。只有在(zai)正(zheng)確校準柯勒(le)(le)照明(ming)的(de)(de)條件下，熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)才能獲得(de)它的(de)(de)更合適的(de)(de)光(guang)學性(xing)能。

柯勒照明(ming)校(xiao)準方(fang)法(fa)如下：

①調(diao)焦(jiao)：把樣品(pin)(pin)放在工作(zuo)臺上，沿光軸方向移動工作(zuo)臺或物鏡，對(dui)樣品(pin)(pin)進行調(diao)焦(jiao)，使(shi)成像(xiang)清晰。

②打開孔徑光闌，把孔徑光闌開到Z大。

③關小視(shi)場(chang)光闌(lan)，于是(shi)在(zai)視(shi)場(chang)里可以看到(dao)視(shi)場(chang)光闌(lan)的影(ying)子，即周圍一圈變暗，只有(you)中間是(shi)亮的。調節聚光鏡上(shang)下位置(zhi)，使(shi)視(shi)場(chang)光闌(lan)邊緣清(qing)晰。調節聚光鏡上(shang)調中螺絲，使(shi)視(shi)場(chang)光闌(lan)居

④減小孔(kong)徑光闌(lan)，一直到(dao)視場里看到(dao)Z好的(de)像(xiang)為止(zhi)，一般孔(kong)徑光闌(lan)為其Z大時的(de)70%。