熒光顯微鏡(jing)是以紫(zi)外線為光源,用(yong)以照(zhao)射(she)被檢物體,使之發出熒光,然后(hou)在顯微鏡下觀察物體的形狀及(ji)其(qi)所在位置。
熒(ying)(ying)(ying)光顯(xian)微鏡(jing)(jing)用于(yu)研(yan)究細(xi)胞(bao)內(nei)物(wu)質(zhi)的(de)吸收(shou)、運輸(shu)、化學物(wu)質(zhi)的(de)分布及定位等。細(xi)胞(bao)中有(you)些(xie)物(wu)質(zhi),如葉(xie)綠(lv)素等,受紫(zi)外線(xian)照射(she)后(hou)可(ke)發熒(ying)(ying)(ying)光;另(ling)有(you)一(yi)些(xie)物(wu)質(zhi)本身雖不能發熒(ying)(ying)(ying)光,但(dan)如果用熒(ying)(ying)(ying)光染料或熒(ying)(ying)(ying)光抗體染色(se)后(hou),經紫(zi)外線(xian)照射(she)亦可(ke)發熒(ying)(ying)(ying)光,熒(ying)(ying)(ying)光顯(xian)微鏡(jing)(jing)就是對這類(lei)物(wu)質(zhi)進行定性和定量研(yan)究的(de)工具之(zhi)一(yi)。
熒光顯微鏡的標本制作(zuo)要(yao)求:
1、載玻(bo)片(pian)
載(zai)玻(bo)(bo)片(pian)(pian)厚度應在(zai)0.8~1.2mm之間,太厚的坡(po)片(pian)(pian),一(yi)方面(mian)光吸收多,另一(yi)方面(mian)不能(neng)使激發光在(zai)標本上聚集。載(zai)玻(bo)(bo)片(pian)(pian)要光潔(jie),厚度均(jun)勻,無明顯(xian)自(zi)發熒光。有時需(xu)用石英玻(bo)(bo)璃(li)載(zai)玻(bo)(bo)片(pian)(pian)。
2、蓋(gai)玻片
蓋玻(bo)片厚度在0.17mm左右(you),光(guang)潔。為了加強激(ji)(ji)發光(guang),也(ye)可用于涉蓋玻(bo)片,這(zhe)是一種特制(zhi)的(de)(de)表面鍍(du)有(you)若干(gan)層對不同波(bo)長的(de)(de)光(guang)起(qi)到不同干(gan)涉作用的(de)(de)物質(如(ru)氟化(hua)鎂(mei))的(de)(de)蓋玻(bo)片,它可以使熒光(guang)順利通過,而反射(she)激(ji)(ji)發光(guang),這(zhe)種反射(she)的(de)(de)激(ji)(ji)發光(guang)可激(ji)(ji)發標本。
3、標本
組織切片或其他標本不能太厚,若太厚激發光(guang)大部分消耗在標本下部,而物鏡直接(jie)觀察到的上部不充分激發。另外,細(xi)胞重(zhong)疊或雜質掩蓋(gai),影響判斷。
4、封裱劑(ji)
封裱劑(ji)常用甘油,要(yao)無自發熒光,無色(se)透明,熒光的亮(liang)度在pH8.5~9.5時(shi)較亮(liang),不易很(hen)快褪(tun)去。
5、鏡油
一般暗視野熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)(jing)和(he)用油鏡(jing)(jing)觀察(cha)標本(ben)時(shi),要使用鏡(jing)(jing)油,要使用特制的無熒(ying)光(guang)鏡(jing)(jing)油,也可(ke)用上(shang)述甘油代替,液體石蠟也可(ke)用,只是折光(guang)率較低(di),對圖(tu)像質量略有(you)影響。