熒光顯微鏡用于研(yan)究(jiu)細胞內物質的吸收(shou)、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物(wu)(wu)質(zhi),如葉(xie)綠素等,受紫外(wai)線照射后可發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang);另(ling)有一些物(wu)(wu)質(zhi)本身雖不能(neng)發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang),但如果用(yong)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)染料或熒(ying)(ying)光(guang)(guang)抗體染色(se)后,經(jing)紫外(wai)線照射亦(yi)可發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang),熒(ying)(ying)光(guang)(guang)顯微鏡就是對這類物(wu)(wu)質(zhi)進行定(ding)性和定(ding)量研究的(de)工具之一。
使用(yong)方法:
(1)打開燈源,超高(gao)壓汞燈要預熱(re)15min才能達(da)到亮點。
(2)透射式熒光(guang)顯(xian)微鏡(jing)需在(zai)光(guang)源與(yu)暗(an)視野聚光(guang)器之間(jian)裝上所要求的激(ji)發濾片,在(zai)物鏡(jing)的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光(guang)顯(xian)微鏡(jing)需在(zai)光(guang)路的插(cha)槽中(zhong)插(cha)入所要求的激(ji)發濾片、雙色束(shu)分離器、壓制濾片的插(cha)塊。
(3)用低倍(bei)鏡觀察(cha),根(gen)據不(bu)同型號熒(ying)光顯微鏡的(de)調節裝(zhuang)置(zhi),調整光源中心,使其(qi)位于整個(ge)照明光斑(ban)的(de)中央。
(4)放置標(biao)本(ben)片(pian),調焦后即可(ke)觀(guan)察。使用中應注意:未裝濾光片(pian)不要用眼(yan)直接(jie)觀(guan)察,以(yi)免引起眼(yan)的損傷(shang);用油鏡觀(guan)察標(biao)本(ben)時,B須用無熒光的特殊鏡油;高壓汞(gong)(gong)燈關閉后不能立即重新打(da)開,需待汞(gong)(gong)燈完全(quan)冷卻(que)后才能再啟(qi)動,否則(ze)會不穩(wen)定,影響(xiang)汞(gong)(gong)燈壽命。
(5)觀察。例如:在熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡下用(yong)藍紫光濾光片(pian),觀察到經0.01%吖啶橙(cheng)(cheng)熒(ying)光染料(liao)染色的細(xi)胞(bao),細(xi)胞(bao)核(he)和細(xi)胞(bao)質被(bei)激(ji)發(fa)產(chan)生兩種不同(tong)顏(yan)色的熒(ying)光(暗綠色和橙(cheng)(cheng)紅(hong)色)。