熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具,由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)利用一定波長的光激(ji)發標本發射熒光,通過物鏡和目鏡系(xi)統放大以觀察標本的熒光圖像。
熒光顯微鏡多采用200W的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內充一定數量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起水銀蒸發,球內氣壓迅速升高,當水銀完全蒸發時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約需5~15分鐘。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光,足以激發各類熒光物質,因此,為熒光顯微鏡普遍(bian)采用。超高(gao)壓(ya)汞燈也(ye)散發大量(liang)熱能。因此,燈室(shi)要有很好的散熱條件,工(gong)作(zuo)環境溫度不宜太高(gao)。
超(chao)高(gao)(gao)壓(ya)(ya)汞燈在使(shi)用(yong)初期不(bu)需高(gao)(gao)電壓(ya)(ya)即可引燃,使(shi)用(yong)一(yi)(yi)些時(shi)間后,則(ze)(ze)需要高(gao)(gao)壓(ya)(ya)啟動(約(yue)為(wei)15000V),啟動后,維持工作(zuo)(zuo)電壓(ya)(ya)一(yi)(yi)般為(wei)50~60V,工作(zuo)(zuo)電流(liu)約(yue)4A左右。200W超(chao)高(gao)(gao)壓(ya)(ya)汞燈的平(ping)均壽命,在每次使(shi)用(yong)2h的情(qing)況下約(yue)為(wei)200h,開動一(yi)(yi)次工作(zuo)(zuo)時(shi)間愈短(duan),則(ze)(ze)壽命愈短(duan),如開一(yi)(yi)次只工作(zuo)(zuo)20min,則(ze)(ze)壽命降(jiang)低50%。
因此,使用熒(ying)光顯微(wei)鏡時盡(jin)量減(jian)少啟動次(ci)數。燈(deng)泡在(zai)使用過程中(zhong),其光效(xiao)是逐漸降低的。燈(deng)熄(xi)滅后要等待冷卻才能重新啟動。點(dian)(dian)燃燈(deng)泡后不可立即關(guan)閉,以免水銀蒸發(fa)不完全(quan)而損壞電極(ji),一般需(xu)要等15min。由于超高壓汞燈(deng)壓力很高,紫外線(xian)強烈,因此燈(deng)泡要置燈(deng)室中(zhong)方可點(dian)(dian)燃,以免傷(shang)害眼睛和發(fa)生爆炸時造(zao)成操作者受傷(shang)。