熒光是生物和分析顯微鏡中常用的物理現象之一,主要是因為它具有靈敏度高、特異性強的特點。當高能量短波長的光線激發某種物質時,高能量的光子與物質中電子碰撞,使得電子從基態躍遷到激發態。激發態的電子不穩定,會回落到基態,這個過程中會消耗部分熱能,并發出新的光子。新的光子能量比激發的光子能量低,因此波長更長。這就是熒光效應,也就是熒光顯微鏡看(kan)到的熒光圖像的原(yuan)理。
熒光(guang)顯微(wei)鏡(jing)在使用時需要根據濾色片鏡組的激發光譜特性選擇合適的熒光染料,允許用戶決定單個分子種類的分布、數量及其在細胞內的位置,可以實現共區域化和相互作用的研究,離子濃度以及觀察細胞內間的胞吞和胞吐過程,可以成像亞分辨率結構。今天咱們來了解下熒光(guang)顯微鏡(jing)中激光鏡可(ke)選擇的聚光器都(dou)有什么區別:
①明視野聚光器
一(yi)般多用明視野聚(ju)光器,它具有聚(ju)光力(li)強,使(shi)用方便,特別適于低、中倍放大的標本觀察。
②暗視(shi)野聚(ju)光器
暗視野(ye)聚(ju)光(guang)(guang)器在(zai)該設備中(zhong)的(de)應用(yong)(yong)日益廣泛(fan)。因為激發(fa)光(guang)(guang)不直接進入物鏡,因而(er)(er)除散(san)射光(guang)(guang)外,激發(fa)光(guang)(guang)也不進入目(mu)鏡,可(ke)以使用(yong)(yong)薄的(de)激發(fa)濾板(ban),增強(qiang)(qiang)激發(fa)光(guang)(guang)的(de)強(qiang)(qiang)度(du),壓制濾板(ban)也可(ke)以很(hen)薄,因紫外光(guang)(guang)激發(fa)時,可(ke)用(yong)(yong)無色濾板(ban)(不透過紫外)而(er)(er)仍然產(chan)生黑暗的(de)背景。從而(er)(er)增強(qiang)(qiang)了熒光(guang)(guang)圖像的(de)亮度(du)和(he)反(fan)襯度(du),提高了圖像的(de)質量,觀察舒適,可(ke)能(neng)發(fa)現亮視野(ye)難(nan)以分(fen)辨的(de)細微(wei)熒光(guang)(guang)顆粒。
③相差熒光聚光器(qi)
相差聚光(guang)器與相差物鏡(jing)配合使用,可(ke)同時進行相差和熒光(guang)聯合觀(guan)(guan)察(cha),既能(neng)看到熒光(guang)圖像(xiang),又能(neng)看到相差圖像(xiang),有助于(yu)熒光(guang)的定位(wei)準確。一般熒光(guang)觀(guan)(guan)察(cha)很少需(xu)要這種(zhong)聚光(guang)器。