熒光顯微鏡是(shi)免疫熒光組(zu)織化學(xue)的基本工具。它是(shi)由(you)超高壓光源、濾片系統(包括激發和壓(ya)制濾板)、光(guang)(guang)學系統(tong)和攝(she)影系統(tong)等主要部件組成，是(shi)利用一(yi)定波長的(de)光(guang)(guang)激發(fa)標本發(fa)射熒(ying)光(guang)(guang)。

熒光顯微鏡(jing)激發熒光(guang)的方式：按光(guang)的波長范圍分為UV激發法(使用紫外線照(zhao)明(ming)法)和BV激發法(使用藍紫光(guang))兩(liang)種。

UV激發法(fa)是用短于400nm外光(guang)進行激(ji)發。該法不存在可見的(de)(de)激(ji)發光(guang)，所(suo)以被觀察的(de)(de)熒光(guang)呈(cheng)現(xian)該染料固有的(de)(de)熒光(guang)，容(rong)易判別標本上的(de)(de)特(te)異(yi)熒光(guang)和背景組織(zhi)的(de)(de)自身熒光(guang)。

BV激發法(fa)是(shi)以(yi)404nm、434nm為ZX的由紫外至藍光進行激發。該方法使用藍光照射標本，所以熒光顯(xian)微鏡的截止濾光片要使用可完全阻斷藍光并(bing)可充(chong)分通(tong)過所需綠、黃熒(ying)光的(de)濾光片。用于熒(ying)光抗體法的(de)熒(ying)光色素。對(dui)于激發(fa)光的(de)很大(da)吸收波長和(he)熒光的很大發光波(bo)長(chang)比較接近，所以(yi)BV激發法使(shi)用(yong)的濾光片要使用(yong)銳(rui)截止式濾(lv)光(guang)(guang)片。該法可用(yong)藍光(guang)(guang)作為激發(fa)光(guang)(guang)，所以熒光(guang)(guang)色素(su)的吸收(shou)效率較高，可得到(dao)較明亮(liang)的圖(tu)像。其缺點是500nm以下的熒光無法看(kan)到，而500nm以上的(de)使整個(ge)圖像顯(xian)黃色(se)。在熒(ying)光(guang)抗體(ti)法中，大多以熒(ying)光(guang)色(se)素特有的(de)顏色(se)來判斷其特異性(xing)，所以在討論微(wei)妙的(de)特異性(xing)時，上述BV激發法的缺點往往影響很大。

綜上所述，熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡的照明可根據聚光器的構造和激發光的波長按以下三點考慮。

①從(cong)熒光(guang)像的反(fan)差要求來(lai)看，UV激發暗場聚光(guang)器(qi)照明(ming)Z好。

②以像的亮度來(lai)考慮，BV激發濾光片暗場觀察效率Z高。

③UV激發(fa)濾光(guang)片(pian)暗(an)(an)場(chang)觀察和BV激發(fa)暗(an)(an)場(chang)聚光(guang)器照明的特性(xing)，可(ke)看(kan)作(zuo)介于這兩種照明方法之(zhi)間，但前者濾光(guang)片(pian)暗(an)(an)場(chang)的性(xing)質(zhi)較強(qiang)，顯(xian)示(shi)圖像較明亮，反(fan)差小;后者因保留(liu)暗(an)(an)場(chang)光(guang)路的性(xing)質(zhi)，故顯(xian)示(shi)圖像較暗(an)(an)，而反(fan)差有所改善。當實際(ji)使用熒光顯(xian)微(wei)鏡時，應采用Z適(shi)合標本要求(qiu)的(de)照明法進行(xing)觀(guan)察。

要指(zhi)出的是，即使像(xiang)反差Z佳的UV激(ji)發暗場聚光(guang)器照明(ming)，由標本折射或散射的部分紫外(wai)激(ji)發光(guang)也會(hui)進(jin)入物鏡，這樣(yang)在光(guang)學系統(tong)中(zhong)的加拿大(da)膠膠合(he)面和光(guang)學玻璃因激(ji)發引起的自(zi)身熒光(guang)會(hui)使像(xiang)的反應變壞。因此，在目(mu)鏡前面使用(yong)紫外(wai)吸收濾(lv)光(guang)片作為截止濾(lv)光(guang)片。